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細胞計數和細胞活力測量對於(yu) 許多不同樣品類型的廣泛研究應用至關(guan) 重要。治療和醫學研究細胞計數過程包括血液測量，如紅細胞計數、白細胞活力檢測和樹突狀細胞監測。可以使用血球計數器進行計數，但手動計數的不準確和耗時性可能非常有限。使用自動細胞計數儀(yi) 可獲得最佳結果，但仍需要考慮一些最佳實踐，以確保結果準確且可重現。無論您是手動計數細胞，還是使用 CellDrop™ 自動細胞計數儀(yi) 等自動化係統，這都適用。
對於(yu) 每種細胞計數方法，樣品表麵必須清潔。任何汙染都可能導致結果不準確。手動細胞計數包括移除和清潔玻璃蓋玻片，然後用 70% 乙醇和水清潔計數室。使用一次性塑料載玻片時，每個(ge) 樣品（如果載玻片有兩(liang) 個(ge) 腔室，則為(wei) 一對樣品）都需要一張新的載玻片。
使用 CellDrop 係列儀(yi) 器，腔室在兩(liang) 個(ge) 彼此平行的光學級藍寶石表麵之間形成。樣品在表麵之間移液，並通過表麵張力固定到位。要清潔表麵，隻需用幹燥的實驗室濕巾擦拭即可。
如需進一步清潔，用 15 μL 70% 乙醇或 10% 漂白劑衝(chong) 洗腔室。加載後，讓溶液靜置 ~10 秒，然後用實驗室幹抹布清潔表麵。
在加載樣品之前立即混合對於(yu) 確保分析樣品的代表性至關(guan) 重要。
不同大小和類型的像元將以不同的速率沉降和聚集。在上樣前立即混合溶液可增加等分試樣均勻並準確反映細胞培養(yang) 物特性的可能性。
細胞計數需要分析整個(ge) 儲(chu) 備液中的少量樣品，因此必須注意確保樣品具有原始儲(chu) 備培養(yang) 物的代表性。雖然像 CellDrop 這樣的細胞計數儀(yi) 應用算法來識別團塊中的細胞，但它們(men) 無法校正不具有代表性的樣品。手動計數時，團塊的評分比單個(ge) 細胞更主觀，這增加了用戶之間的可變性。
細胞裂解後的細胞外 DNA 和細胞碎片是結塊的常見原因。細胞裂解可能是由過度生長、過度移液造成的機械剪切、凍融循環以及胰蛋白酶消化不足或過度引起的，也可能導致樣品異質性。通過避免細胞裂解的原因和過濾樣品中的細胞碎片，可以減少細胞團塊。
無論是手動計數還是依靠軟件算法進行計數，調整對焦和曝光設置以確保細胞的最佳可見性以獲得最準確的結果都很重要。
最佳對焦和曝光將顯示細胞膜和背景之間的鮮明對比。
針對熒光應用單獨優(you) 化每個(ge) 熒光通道的能力將產(chan) 生最可重現的結果。應設置熒光強度以確保細胞在保持其實際大小的同時盡可能明亮。光線不應滲過細胞的邊緣。
有一係列血球計數器可供選擇，深度和網格設計各不相同。請注意在計算中使用正確的詳細信息以避免錯誤。
CellDrop 具有一定的功能，與(yu) 其他基於(yu) 玻片的計數儀(yi) 相比，可實現更寬的細胞密度範圍。裝載室高度可通過軟件進行調整，以適應最寬的細胞密度和粒徑範圍。提供屏幕指導以確保最佳高度，並自動調整計算。
大多數自動細胞計數儀(yi) 都包含可調整的設置，以最好地匹配正在研究的細胞。例如，可以設置並保存像元大小範圍，以從(cong) 分析中排除碎片或其他像元群。
還提供了用於(yu) 定義(yi) 單元格形狀的設置。對於(yu) CellDrop，可以在細胞計數之前或之後調整設置，並根據新參數重新分析數據。
明場分析可有效計數培養(yang) 的哺乳動物細胞。然而，使用台盼藍可能很難區分活細胞和死細胞，並且對於(yu) 許多原代細胞，需要熒光。
例如，外周血單核細胞 （PBMC） 通常與(yu) 大量紅細胞 （RBC） 混合，使用明場分析可能顯示為(wei) “死亡"。然而，使用吖啶橙 （AO） 和碘化丙啶 （PI） 等染料，可以僅(jin) 對有核 PBMC 進行染色，並使用雙重熒光功能區分活體(ti) 和死體(ti) 。
AO 和 PI 都可以對核酸進行染色，但隻有 AO 可以穿過活細胞膜。因此，活的 PBMC 用 AO 染色並發出綠色熒光，死的 PBMC 用 AO 和 PI 染色並發出紅色熒光。紅細胞未染色，根本不發出熒光。
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