qPCR 探針的多種不同填料為(wei) 科學家在檢測開發過程中提供了豐(feng) 富的選擇。鎖定核酸 (LNA)、小溝結合物 (MGB) 和 BHQplus™ 探針均可增強雙鏈體(ti) 穩定性,這有助於(yu) 您的檢測獲得高信噪比,同時保持寡核苷酸長度相當緊湊。它們(men) 還能夠更好地適應具有挑戰性的靶標,如富含 A-T 的序列。但每種探針類型的化學性質意味著您將獲得最佳的檢測性能 – 信噪比、檢測限 (LOD) 等。– 當您將探頭類型與(yu) 應用程序匹配時。
MGB 探針適用於(yu) 檢測 SNP 和困難的基因表達靶標
MGB 探針的長度通常為(wei) 8-30 個(ge) 堿基,5' 端有一個(ge) 熒光團,3' 端有一個(ge) 淬滅基團。3' 末端也連接到一個(ge) 化學部分 - MGB - 該化學部分與(yu) 雙鏈 DNA 的小溝非共價(jia) 結合。
由於(yu) MGB 附著在寡核苷酸的末端,因此易於(yu) 設計 - 隻需使用與(yu) 目標區域互補的寡核苷酸序列即可。這使得 MGB 探針成為(wei) 檢測 SNP 和困難的基因表達靶標(例如富含 A-T 含量的序列)的理想選擇。
然而,雖然設計可能很簡單,但熔融溫度 (Tm) 無法進行微調。
LNA,也稱為(wei) 橋式核酸,是經過修飾的堿基,其中糖的 2' 氧和 4' 碳與(yu) 亞(ya) 甲基橋共價(jia) 連接。
含有 LNA 的探針如何工作?當使用一個(ge) 或多個(ge) LNA 代替未修飾的單體(ti) 時,探針-靶標雙鏈體(ti) 的穩定性得到增強。 雙工穩定化的量取決(jue) 於(yu) 許多因素,包括使用的 LNA 數量以及 LNA 在探針中的位置。因此,您可以微調 LNA 探針的設計,以達到所需的特異性和穩定性水平。
LNA 探針適合哪些應用?什麽時候應該使用 LNA 探頭?雖然設計比 MGB 探頭稍微複雜一些,並且需要迭代測試以微調性能和 Tm,LNA 探針可以提供更好的特異性和對非靶序列的區分度。 它們(men) 非常適合需要高特異性的應用。
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對用於(yu) SYBR Green 檢測的 LNA 增強引物感興(xing) 趣?除了提供 LNA 探針外,Biosesearch Technologies 還合成具有內(nei) 部 LNA 修飾的定製寡核苷酸。
與(yu) LNA 探針一樣,BHQplus 探針利用化學修飾的單體(ti) 來增強探針-靶標雙鏈體(ti) 的穩定性和特異性。
然而,BHQplus 探針中使用的專(zhuan) 有化學成分與(yu) LNA 不同,這為(wei) 科學家提供了另一種探針化學選擇。
與(yu) LNA 探針一樣,BHQplus 探針非常適合需要高靈敏度和特異性的應用。它們(men) 為(wei) LNA 探頭技術提供了一種更易於(yu) 設計且價(jia) 格更具競爭(zheng) 力的替代方案,當您不需要微調探頭性能時,它是一個(ge) 不錯的選擇。
雖然我們(men) 已經強調了使每種探針化學成分大放異彩的具體(ti) 優(you) 勢,但其中有很多重疊,您可能希望在檢測開發過程中試用每種類型的探針。