PNA寡核苷酸處理方案

1.PNA具有較高的親(qin) 和力和特異性。

2.富含嘌呤的PNA低聚物的溶解度降低，並傾(qing) 向於(yu) 聚集。建議低聚物的嘌呤含量低於(yu) 50%，在PNA夾中一個(ge) 低聚物的嘌呤（特別是G堿段不超過6段），因為(wei) 水溶性非常重要。可以添加兩(liang) 個(ge) 賴氨酸來提高長PNA或具有高嘌呤的PNA的溶解度。

存儲(chu) 和 處理

1.PNA作為(wei) 凍幹粉（超過5年）或作為(wei) 水中溶液（至少一年）儲(chu) 存起來非常穩定-20°或更低。對於(yu) 長期存儲(chu) ，-70°

2.當準備使用時，向下旋轉試管，將50n摩爾的PNA溶解在1 ml無菌水中，製成50 uM的原液。渦旋和混合良好，以

實現*全溶解。

3.平均分配和儲(chu) 存在-20°或-70°工作原液可以進一步稀釋10倍（5毫米，10倍），並在4度下保存幾周。

4.當PNA解凍時，加熱至55°中浸泡5分鍾，以實現*全溶解。

PCR 反應

*下麵是一個(ge) 例子。實際情況可能根據序列而變化，需要根據經驗來確定。

1.準備以下PCR混合。

a.25 ul 2x PCR混合物

b.FW和RV PCR引物分別為(wei) 最終0.2 uM

c.5 ul PNA鉗夾（5 uM庫存）至最終0.5uM（範圍：0.2~5 uM）

d.DNA模板： 20 ng（10~50 ng）

e.水至50 ul

2.按如下方法運行PCR程序。

a.變性：94度 3 min

b.放大(22~40循環）

i.變性：94度 30 sec

ii.PNA夾具：65~75度為(wei) 20秒（比PNA工具計算的Tm低5~10度）

iii.底漆退火：55~65度為(wei) 20秒

iv.擴展：68度為(wei) 30秒

c.擴展：72度, 10 min

d.保持在4度

3.取5ulPCR產(chan) 物，在瓊脂糖凝膠上運行。

4.夾緊反應中最常見的PNA濃度為(wei) 0.4~2 uM。一般來說，如果溶解度不受影響，更高濃度的PNA可以提供更好的夾緊效果。