gbiosesciences蛋白質交聯劑概述

交聯劑包含至少兩(liang) 個(ge) 反應性基團，它們(men) 對包括巰基和胺在內(nei) 的許多基團具有反應性，並在兩(liang) 個(ge) 或多個(ge) 分子之間產(chan) 生化學共價(jia) 鍵。可用交聯劑靶向的官能團是伯胺、羧基、巰基、碳水化合物和羧酸。蛋白質分子具有許多這樣的官能團，因此蛋白質和肽可以使用交聯劑容易地結合。交聯劑用於(yu) 研究蛋白質結構和功能，將蛋白質錨定在固體(ti) 支持物上，製備免疫原、免疫毒素和其他結合的蛋白質試劑。

交聯劑可以根據反應性基團的數量和相似性分成幾組:

• 同雙功能具有兩(liang) 個(ge) 相同的反應端。

• 異雙功能具有兩(liang) 個(ge) 不同的反應端。

同雙官能交聯劑用於(yu) 一步反應，而異雙官能交聯劑用於(yu) 兩(liang) 步連續反應，其中最不穩定的反應末端首先反應。同雙官能交聯劑具有導致自結合、聚合和細胞內(nei) 交聯的趨勢。另一方麵，異雙官能試劑允許更可控的兩(liang) 步反應，這使得不希望的分子內(nei) 交叉反應和聚合反應最小化。

廣泛使用的異雙功能交聯劑用於(yu) 通過胺和巰基偶聯蛋白質。最不穩定的胺反應性NHS-酯首先偶聯，在除去未偶聯的試劑後，繼續偶聯巰基。巰基反應基團通常是馬來酰亞(ya) 胺、吡啶基二硫化物和α-鹵代乙酰基。其他交聯劑包括碳二亞(ya) 胺，它連接羧基(-COOH)和伯胺(-NH2)。存在具有一個(ge) 光反應性末端的異雙官能交聯劑。光反應性基團在沒有特定基團可與(yu) 之反應時使用，因為(wei) 光反應性基團在暴露於(yu) 紫外光時會(hui) 發生非特異性反應。

通常希望最小化由於(yu) 交聯反應引起的結構變化的程度，如果蛋白質分子具有生物活性則更是如此。因此，交聯是在溫和的緩衝(chong) 液和pH條件下進行的。根據應用，結合程度也很重要，並且必須保持最佳的交聯劑與(yu) 蛋白質的比例。蛋白質外表麵上目標基團的數量也很重要。如果暴露的目標基團易於(yu) 結合；可以使用較低的交聯劑與(yu) 蛋白質的比率。

交聯劑具有不同的間隔臂長度。當兩(liang) 個(ge) 目標基團相距較遠時，可以使用具有較長間隔臂的交聯劑。具有不同間隔臂的交聯劑的可用性使得交叉反應效率更優(you) 化。具有短間隔臂的交聯劑適用於(yu) 分子內(nei) 交聯。可切割的交聯劑也是可用的，這擴展了蛋白質分析的範圍。

蛋白質交聯劑的選擇

當選擇交聯劑時，要考慮以下特征:

1.試劑溶解度

2.反應基團的性質

3.同雙功能或異雙功能

4.光反應性或熱反應性基團

5.間隔臂的長度

6.共軛產(chan) 物可裂解與(yu) 否

7.進一步標記的可能性

8.結合所需的反應條件

Double Do交聯劑

G-Biosesciences提供多種交聯劑作為(wei) Double Do交聯劑。Double Do交聯劑係列產(chan) 品包括化學交聯劑、由特定反應緩衝(chong) 液組成的支持附件、完整的反應係統、選擇指南和方案。

為(wei) 了選擇交聯劑，需要考慮幾個(ge) 因素:

• 反應方向:確定要交聯的目標殘基，選擇不幹擾蛋白質功能的試劑。

• 膜滲透性:對於(yu) 細胞表麵標記，選擇非膜滲透性試劑。

• 劈得開的:便於(yu) 從(cong) 固體(ti) 支持物上釋放交聯蛋白或用於(yu) 進一步的下遊應用。

• 可逆的:可裂解試劑的替代物是可逆試劑。例如，ANB-NOS是通過光解作用釋放的。

• 空間阻礙:結合位點周圍的大基團可能需要具有更長間隔臂的試劑。