如何選擇正確的二抗？

二級抗體(ti) 用於(yu) 幾種免疫分析中，以檢測一級抗體(ti) 的存在。這些抗體(ti) 與(yu) 酶、生物分子或熒光染料結合，以檢測一抗。與(yu) 一級抗體(ti) 不同，二級抗體(ti) 是針對一級抗體(ti) 的種類和同種型產(chan) 生的，通過在多個(ge) 位置與(yu) 一級抗體(ti) 結合來檢測一級抗體(ti) 。

為(wei) 了成功選擇您的第二抗體(ti) ，您應該考慮以下因素:

確保匹配良好–宿主物種是產(chan) 生第二抗體(ti) 的動物，應始終與(yu) 第一抗體(ti) 的宿主不同。例如，如果您使用在兔子中產(chan) 生的一抗，您將需要在不同於(yu) 兔子的物種（如山羊、驢或小鼠）中產(chan) 生的抗兔二抗（圖1）。

完整抗體(ti) 還是片段？–實際上，真正的問題應該是“您的主要抗體(ti) 是單克隆抗體(ti) 還是多克隆抗體(ti) ？"這兩(liang) 個(ge) 問題的答案通常取決(jue) 於(yu) 應用程序。單克隆一抗包含單一同種型的免疫球蛋白。因此，使用特異性識別同種型的二抗至關(guan) 重要。此外，單克隆動物通常飼養(yang) 在小鼠、兔和大鼠中。因此，如果主要單克隆抗體(ti) 是小鼠IgG1，您將需要抗小鼠IgG或特異性較低的F（ab）片段抗小鼠IgG。抗體(ti) 片段適合用於(yu) 免疫組織化學和免疫熒光，因為(wei) 它們(men) 的體(ti) 積較小，能夠穿透組織。然而，較小的大小可能會(hui) 限製與(yu) 片段結合的染料或酶的選擇，導致二抗可能不如全抗體(ti) 敏感。

多克隆一抗包含幾種同種型免疫球蛋白g的混合物。因此，為(wei) 了最大限度地檢測目標，最好使用能識別所有同種型的二抗。多克隆抗體(ti) 通常以全抗體(ti) 形式（重鏈+輕鏈）飼養(yang) 在兔、山羊、綿羊和驢中，因此第二宿主物種必須用來自不同物種的IgG池進行免疫，從(cong) 而使純化的第二抗體(ti) 能夠識別所有形式。例如，如果初級多克隆抗體(ti) 是山羊IgG，您將需要抗山羊IgG（H+L）。然而，全抗體(ti) 可能導致高背景和較低的特異性，因為(wei) 所有免疫球蛋白共享輕鏈，這增加了交叉反應性（圖2）。

根據您的應用選擇共軛物-這取決(jue) 於(yu) 第二抗體(ti) 如何檢測信號。例如，免疫組織化學、ELISA和蛋白質印跡應用使用基於(yu) 生物素標記的比色和化學發光檢測來放大信號和提高靈敏度，以及與(yu) 辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）作用的酶反應。然而，對於(yu) 免疫標記、熒光顯微鏡和流式細胞儀(yi) 實驗，使用熒光染料如Alexa Fluor檢測信號，這些熒光染料直接與(yu) 抗體(ti) 結合以放大信號和靈敏度。

親(qin) 和純化抗體(ti) 與(yu) 交叉吸附抗體(ti) –該步驟用於(yu) 提高抗體(ti) 的特異性，並可在親(qin) 和純化和交叉吸附中進行區分。大多數二抗通過親(qin) 和層析純化，產(chan) 生高親(qin) 和力抗體(ti) 。這種抗體(ti) 通常在IHC使用，因為(wei) 它們(men) 產(chan) 生最小的非特異性結合，也用於(yu) 蛋白質印跡檢測低豐(feng) 度蛋白。交叉吸附的第二抗體(ti) 通常經過額外的純化步驟，以過濾掉與(yu) 非靶免疫球蛋白種類結合的成員。這一步驟增加了它們(men) 的特異性並減少了非特異性背景。這些抗體(ti) 是為(wei) 免疫組織化學等特殊應用而設計的。

總之，二級抗體(ti) 的選擇取決(jue) 於(yu) 手頭的應用和目標豐(feng) 度所需的靈敏度和純化水平以及非特異性結合的風險。

BMA是BMA Biomedicals的縮寫(xie) ，是一家位於(yu) 瑞士北部巴塞爾地區的小型生物技術公司。

由一群免疫學家、生物化學家和生物學家於(yu) 1989年創建，其主要活動領域是抗體(ti) 的開發、生產(chan) 和營銷。2005年，BMA被Chemoforma Inc .收購，chemo forma Inc .是一家長期活躍於(yu) 免疫支持飼料添加劑生產(chan) 領域的商業(ye) 合作夥(huo) 伴。2013年，Chemoforma Inc .收購了總部位於(yu) 加州的半島實驗室國際公司，該公司專(zhuan) 門從(cong) 事抗肽抗體(ti) 和放射免疫分析。

BMA的主要專(zhuan) 長在於(yu) 抗體(ti) 在免疫組織化學和酶免疫分析（ELISAs）中的應用。生產(chan) 已適應無胎牛血清的培養(yang) 基。這不僅(jin) 是對可持續發展和動物福利的重要貢獻，而且產(chan) 品不含汙染性牛抗體(ti) 。它們(men) 通常僅(jin) 供體(ti) 外研究使用，但支持將適當的產(chan) 品授權給診斷領域的公司。

BMA經營自己的設施，擁有先進的分析和生產(chan) 基礎設施。我們(men) 的技術訣竅在於(yu) 單克隆和多克隆抗體(ti) 的生產(chan) 和衍生，以及它們(men) 在免疫學技術中的應用。BMA還許可外部組織的產(chan) 品。這些產(chan) 品可能處於(yu) 早期開發階段，最終將由公司進行生產(chan) 更新。

BMA的產(chan) 品範圍以客戶為(wei) 導向，包括許多專(zhuan) 注於(yu) 有限或專(zhuan) 業(ye) 應用的產(chan) 品。有些是由BMA自己生產(chan) 的，有些是有大量出版記錄的常規產(chan) 品。

BMA的產(chan) 品重點包括以下領域

• 炎症和傳染病
• 止血
• 腫瘤相關疾病
• 獸醫試劑，特別是抗豬組織的抗體