LumiTracker ER Green 和 LumiTracker ER Red 具有細胞滲透性，對內質網 (ER) 染色劑具有高度選擇性，可用於活細胞成像。兩種 ER 染色劑都是 BDP 染料與格列本脲（格列本脲）偶聯的衍生物。格列本脲與 ATP 敏感鉀通道 (K ATP ) 的磺酰脲 (SUR) 受體結合，該受體在內質網上很突出。

用甲醛固定後，染色部分保留。 LumiTracker ER Green 和 LumiTracker ER Red 不適合對固定後的細胞進行染色。

注意：格列本脲的藥理活性可能會(hui) 影響 ER 功能。某些特殊細胞類型中磺脲類受體(ti) 的可變表達可能會(hui) 導致非 ER 標記。

溶液的製備

1.1 庫存溶液的製備

• 將 50 μg LumiTracker ER Green 溶解在 64 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲(chu) 備溶液。

• 將 50 μg LumiTracker ER Red 溶解在 55 μL DMSO 中，以獲得 1 mM 儲(chu) 備溶液。

注意：我們(men) 建議將儲(chu) 備溶液儲(chu) 存在−20°C或−80°C避光條件下。避免反複凍融循環。

1.2 工作液的配製

用鈣和鎂 (HBSS/Ca/Mg) 在 Hank's 平衡鹽溶液中稀釋 LumiTracker ER 染色劑的儲(chu) 備溶液，以獲得工作溶液。使用 100 nM 至 1 μM 的濃度。 LumiTracker ER 染色劑的稀釋度取決(jue) 於(yu) 細胞類型和密度，應通過實驗確定。

細胞染色

2.1 懸浮細胞染色

1. 1000 g離心細胞懸液 3-5 分鍾；棄去上清液。

2. 用預熱的 HBSS 在 37°C 下清洗細胞兩(liang) 次，每次 5 分鍾。

3. 推薦的細胞密度為(wei) 1×10 6 個(ge) 細胞/mL。

4. 將 1 mL 預熱的 LumiTracker ER 工作溶液添加到管中，並在 37 °C 和 5% CO 2下孵育細胞 15-30 分鍾。

5. 室溫下以 400 g離心細胞 3-4 分鍾；棄去上清液。

6. 用培養(yang) 基清洗染色細胞兩(liang) 次。

7. 用無血清細胞培養(yang) 基或 PBS 重懸細胞。

8. 通過流式細胞儀(yi) 分析細胞。

9. 對於(yu) 熒光顯微鏡，將一滴染色的細胞懸浮液轉移到載玻片上。用蓋玻片蓋住細胞。

2.2 貼壁細胞染色

1. 在無菌蓋玻片上培養(yang) 細胞。

2. 貼壁細胞可以直接在蓋玻片上染色。

3. 從(cong) 蓋玻片中吸出介質。

4. 用 37°C 預熱的 HBSS 衝(chong) 洗細胞。

5. 加入 100 μL 預熱的 LumiTracker ER 工作溶液，輕輕搖動以全覆蓋細胞。在 37 °C 和 5% CO 2下孵育細胞 15-30 分鍾。

6. 用培養(yang) 基清洗染色細胞兩(liang) 次。

7. 如果通過流式細胞術檢測，則需要在染色前重懸細胞。

8. 對於(yu) 熒光顯微鏡，將帶有染色細胞的蓋玻片翻轉到載玻片上，將它們(men) 放置在載玻片和蓋玻片之間。

細胞固定

1. 如果要固定染色的細胞，請在 4% 甲醛中於(yu) 4 °C 下孵育 2 分鍾。

2. 固定細胞用 PBS 清洗兩(liang) 次，每次 5 分鍾。

3. 使用封固劑將細胞封固在蓋玻片下 。