squarix探針和染料——RPA產品信息

RDA 用作生物樣品中 Fe 2+的選擇性高量子產(chan) 率熒光標記物。它對鐵的親(qin) 和力比 RPA 略低。膜滲透性化合物的陽離子熒光團允許通過例如熒光顯微鏡進行觀察，並且基於(yu) 線粒體(ti) 的負膜電位，尤其靶向活細胞的線粒體(ti) 。在無細胞係統中，RDA 熒光（λ最大598 nm）會(hui) 被 Fe 2+離子以化學計量（3:1）強烈猝滅。

A:無細胞係統中 RPA 的吸收和發射光譜（“簡單緩衝(chong) 溶液"(SBS) 中的 20 µM RPA：2mM 抗壞血酸、0.15% SDS 和 10mM Tris/HCl，pH 8.2）。

B:Fe 2+對“SBS"中 RPA (20-45 µM) 熒光的影響：Fe 2+是隨著硫酸亞(ya) 鐵銨/脫水檸檬酸三鈉鹽 (FAS) 濃度的增加而從(cong) 添加的儲(chu) 備溶液 (1mM) 中添加的。含有 20mM 抗壞血酸，與(yu) 培養(yang) 基混合。 2 分鍾後，RPA/Fe 2+複合物形成後，測定含有已知濃度的 RPA 和 Fe 2+的培養(yang) 基部分的熒光（以任意單位 au 表示）。零熒光等於(yu) 不含染料的介質的熒光。

RDA 選擇性地積聚在細胞（例如培養(yang) 的肝細胞）的線粒體(ti) 中(1,2)。當鐵以透膜形式添加到細胞中時，線粒體(ti) 內(nei) RDA 熒光會(hui) 被猝滅。當添加膜滲透性過渡金屬螯合劑吡哆醛異煙酰腙和 1,10-菲咯啉後，實驗性地減少線粒體(ti) 可螯合鐵時，它會(hui) 增加。 RDA 熒光的增加允許使用異位校準對活細胞中的線粒體(ti) 可螯合鐵進行特異性定量(1)。

Application in a cellular system

RDA 可以按照 Lit 中的描述使用。 1. 例如，在蓋玻片上培養(yang) 的活細胞與(yu) RDA（0.01-10 µM，由 DMSO 中的 10 µM 或 1-5 mM 儲(chu) 備溶液製備）在 HBSS（“Hanks 平衡"）中於(yu) 37°C 孵育 10-20 分鍾鹽溶液"）。隨後用無染料 HBSS 洗滌細胞 3 次。為(wei) 了避免 RPA 與(yu) 腔室結合並改善線粒體(ti) 負載，應在 RPA 負載後將細胞轉移到第二個(ge) （無指示劑）Pentz 腔室並再孵育 15 分鍾。 37°C。現在應在 37°C 下用適當的培養(yang) 基（例如用於(yu) 肝細胞的 HBBS 或 L-15 培養(yang) 基）覆蓋細胞。使用例如定量激光掃描顯微鏡測定線粒體(ti) 內(nei) RPA熒光。 RPA 的紅色熒光在 λ exc 處被激發。= 543 nm 並通過 λ exc 附近的長通濾波器收集。 = 601 納米。定量和定性測量的掃描參數取決(jue) 於(yu) 實驗所用的顯微鏡係統。測量開始後 5-10 分鍾，可通過添加 FeCl 3 /8-羥基喹啉複合物 (5-15 µM) 或膜滲透鐵螯合劑，例如 PIH（吡哆醛異煙酰腙，2mM）來控製線粒體(ti) 內(nei) 可螯合鐵的水平。 ) 或 1,10-菲咯啉 (2 mM)。對於(yu) 對照測量，平行培養(yang) 物加載含有一些熒光團的鐵不敏感對照 RPAC（羅丹明 B-[（菲-9-基）氨基羰基]苄酯）。應使用與(yu) 上述相同的負載條件。

分子分子式:C ₄₈ H ₄₄ BrN ₅ O ₄

分子量 [克/摩爾]:834.7981 (79.9045+754.8935)

最大吸收:λ max (log ε) = 562 nm (4.95), 510-535

最大排放量:最大波長601 nm

穩定:< 4 ^o C，幹燥避光保存

外貌:紫色固體(ti)

純度:97%+（1 H NMR，500 MHz）

淬火化學計量:RPA/Fe 2+ : 3:1 [摩爾/摩爾]

體(ti) 外毒性:無毒