bigelow培養方法介紹

培養(yang) 基類型

富集培養(yang) 基和人工培養(yang) 基是培養(yang) 基的兩(liang) 種主要類型。富集培養(yang) 基通常通過以下兩(liang) 種方式製備：(1) 通過將土壤或土壤提取物添加到蒸餾水或天然水中，或 (2) 通過將營養(yang) 化學品添加到天然水（例如海水或湖水）中。人工介質僅(jin) 使用“純"水和“純"化學品；它不包括添加未定義(yi) 的土壤或天然湖泊或海水。然而，認識到即使是精心製備的人工培養(yang) 基中也存在未知的“雜質"，這一點非常重要。

富含土壤和水的介質適合維持藻類培養(yang) 。良好的土壤提供無機和有機物質——藻類生長良好，並且培養(yang) 引起的形態變化是有限的。

通過化學濃縮海水製備的海洋介質很常見。然而，使用湖水或河水進行化學富集的淡水培養(yang) 並不常見。相反，人工培養(yang) 基對於(yu) 許多淡水藻類的生長來說很常見並且非常成功，但僅(jin) 當無法使用天然海水基礎進行關(guan) 鍵研究時才使用海洋人工培養(yang) 基。例如，出於(yu) 研究微量元素的目的，使用精心定義(yi) 的人造海水介質來最小化或排除已知汙染物。

類似地，水質、玻璃/塑料器皿清潔度等以與(yu) 化學質量相同的方式影響培養(yang) 基，即不良或有毒物質的存在以及所需物質的缺乏會(hui) 影響藻類生長。培養(yang) 基和培養(yang) 容器可以通過蒸汽高壓滅菌、巴氏滅菌、過濾或微波進行滅菌。

培養(yang) 容器和材料

用於(yu) 培養(yang) 培養(yang) 物和儲(chu) 存培養(yang) 基的所有容器和管道均應仔細選擇，以避免有毒化合物。我們(men) 推薦使用硼矽酸鹽玻璃或組織培養(yang) 級聚碳酸酯和聚苯乙烯塑料器皿製成的燒瓶和試管。黑色試管螺帽應在海水變化時高壓滅菌幾次，因為(wei) 新瓶蓋在加熱時可能會(hui) 釋放出有毒的酚類物質。

同樣，橡膠塞（或任何其他在加熱時釋放有氣味的揮發性化合物的東(dong) 西）應與(yu) 介質分開進行高壓滅菌。應避免使用帶有銅管的老式高壓滅菌器，因為(wei) 過量的銅對藻類有毒。高壓滅菌器蒸汽本身可能被金屬汙染，並且培養(yang) 基可能對開放海洋物種產(chan) 生金屬毒性。

新的玻璃器皿應在稀 NaOH 中脫脂。玻璃器皿可以定期用稀鹽酸清洗，或者，如果擔心金屬汙染，建議在濃鹽酸中長時間浸泡。玻璃器皿不應該用鉻酸清洗，因為(wei) 鉻對許多浮遊植物有毒。燒瓶可以用用粗棉布、矽膠海綿包裹的棉塞或用燒杯蓋住的塞子蓋住。由箔或塑料燒杯製成的蓋可以防止真菌在潮濕的塞子中生長。

大多數科學家在準備培養(yang) 物時會(hui) 豐(feng) 富天然海水。海水來源可能會(hui) 影響成功。一些沿海水域的鹽度降低，某些菌株可能無法忍受。NCMA 使用來自緬因灣的原始水，其鹽度約為(wei) 32 psu。在水華期間不應收集海水，特別是當存在有毒生物時。可以使用過濾器（例如 0.45 µm 玻璃纖維過濾器）去除天然浮遊植物。可以通過添加來去除溶解的有機汙染物每升加入一到幾克活性炭粉末並充分混合。第二天通過傾(qing) 析和過濾除去碳。

為(wei) 了簡化常規培養(yang) 基製備，通常製備工作儲(chu) 備溶液。添加少量液體(ti) 儲(chu) 備溶液比稱量單個(ge) 幹化學品更容易、更快捷。最好將原液添加到水中並混合 - 直接混合原液而不用水稀釋可能會(hui) 導致不良沉澱。營養(yang) 強化劑要麽(me) 在滅菌前添加，要麽(me) 在滅菌後無菌添加。滅菌是通過在 121°C、15 lb/in2 下高壓滅菌 15 分鍾或更長時間來完成，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 所涉及的體(ti) 積。高壓滅菌後應盡快冷卻培養(yang) 基以避免沉澱。二氧化矽可以增強沉澱，因此如果藻類不需要矽，最好將矽酸鹽排除在培養(yang) 基之外。

營養(yang) 物質可能會(hui) 被細菌或真菌汙染。因此，謹慎的做法是首先對原液進行高壓滅菌，然後采用良好的無菌技術。應仔細密封儲(chu) 備溶液，因為(wei) 蒸發會(hui) 濃縮營養(yang) 儲(chu) 備。維生素庫存可以冷凍很長時間而不會(hui) 明顯降解。在玻璃容器中高壓滅菌 Na2SiO3 儲(chu) 備溶液可能會(hui) 導致二氧化矽蝕刻或碎片狀沉澱。因此，我們(men) 建議在聚四氟乙烯塗層瓶中製備矽酸鹽儲(chu) 備溶液。

高壓滅菌後，培養(yang) 基應放置約 24 小時，同時氣體(ti) （尤其是 CO2）擴散到液體(ti) 中。通過快速冷卻可以最大限度地減少沉澱。對於(yu) 大多數海水介質來說，最終 pH 值為(wei) 7.8-8.2 是理想的。