唾液樣本可以以方便、微創、可重複的方式采集。唾液是一種複雜的異質生物樣本,如果收集不當可能會(hui) 導致數據錯誤。然而,通過遵循正確的唾液采集和處理程序,可以從(cong) 這種樣本類型中獲得高質量、可重複的數據。 收集唾液之前要考慮什麽(me) ?
唾液中許多分析物的水平不會(hui) 保持靜態,濃度可能會(hui) 因多種影響而發生變化 (1-5)。個(ge) 體(ti) 之間的樣本也可能存在很大差異。根據感興(xing) 趣的分析物和研究的性質,有幾個(ge) 因素可能很重要:
收集時間——大多數激素表現出晝夜節律的表達,對於(yu) 某些唾液蛋白來說也是如此。基於(yu) 皮質醇的研究尤其受到晝夜周期中皮質醇表達節律的影響,並且針對皮質醇晝夜表達的特定研究是研究設計的核心。我們(men) 建議查看文獻中的最新建議或根據待測試的分析物向專(zhuan) 家谘詢具體(ti) 建議。對於(yu) 大多數研究來說,樣本收集應該在特定時間或在一個(ge) 時間窗口內(nei) 進行,以獲得最有意義(yi) 的測量。
反應和恢複特征——如果研究涉及幹預措施和壓力源,則應定時收集樣本以正確捕獲反應。對於(yu) 持續數月的較長間隔研究或測量壓力反應的實驗室壓力源研究來說,情況確實如此。
吸收裝置可能會(hui) 收集局部唾液而不是整個(ge) 唾液,這可能會(hui) 影響某些分析物的結果。 α-澱粉酶和分泌型 IgA 等蛋白質的唾液水平確實根據口腔位置的不同而有所不同 (6-8)。我們(men) 建議將吸收裝置放置在唾液聚集的位置。對於(yu) 直立坐著的成人或兒(er) 童來說,口腔底部(舌頭下方)是理想的位置。對於(yu) 處於(yu) 傾(qing) 斜位置的嬰兒(er) 、成人和兒(er) 童,我們(men) 建議將頭轉向一側(ce) ,並從(cong) “積聚"唾液的臉頰一側(ce) 收集唾液。當通過被動口水收集唾液時,我們(men) 建議讓唾液積聚在舌下,並通過吸管狀收集輔助裝置輕輕地將收集到的口水推入管中。該樣本還將代表從(cong) 所有唾液腺收集的唾液,並消除從(cong) 特定唾液腺收集唾液的任何偏差。
一些親(qin) 水性分析物(例如 DHEA-S 和/或較大蛋白質(例如 SIgA))的水平隨著唾液流速的增加而降低,並且唾液 α-澱粉酶也可能受到類似影響 (9, 10)。目前,我們(men) 建議研究人員共同改變 α-澱粉酶、SIgA 和 DHEA-S 等分析物的分泌速率 (mL/min)。
記錄收集所需唾液量所需的總時間,以便測定結果可以乘以流速(mL/分鍾),以便將結果表示為(wei) 分泌率(每單位時間的輸出)。
示例 (SIgA):205.60 µg/mL x 1.33 mL/min = 273.45 µg/min
要確定使用吸收裝置收集唾液時的流速,請在收集前後對拭子和儲(chu) 存管一起稱重。 (唾液密度可假定為(wei) 1.0 g/mL 的近似值。)同時記錄拭子在口腔中的時間長度,以便可以估計流速。
現代免疫測定設計為(wei) 使用小樣本量(小於(yu) 100 µL),並且在大多數情況下,不需要刺激劑來收集足夠的樣本量。我們(men) 建議在收集唾液樣本時不要使用口腔刺激劑,因為(wei) 可能會(hui) 導致測定幹擾或某些分析物水平的改變 (11);目標應該是盡量減少唾液測試結果中不必要的變異來源。例如,即使咀嚼無味的石蠟/蠟也可能影響流量依賴性分析物。
如果刺激劑是絕對必要的(不使用刺激劑就無法收集唾液);
在整個(ge) 研究過程中以一致的方式謹慎使用 (12)。
在使用口服刺激劑之前,考慮使用嗅覺或視覺刺激。
在實際收集之前嚐試與(yu) 研究參與(yu) 者一起練習(xi) ,以確保在實際研究收集之前熟悉該方法。
進行試點研究以確保口服刺激劑不會(hui) 造成測定或分析物幹擾 (11)。
在樣品采集之前,請查看分析物采集方案或根據要執行的檢測的數量和類型
如果您計劃在當前的研究中包括 DNA 分析,正在存檔以供將來某個(ge) 日期進行 DNA 分析,或者希望對之前存檔的現有樣本進行 DNA 分析
許多分析物在體(ti) 循環中的水平高於(yu) 唾液中的水平,並且在特定條件下血液汙染可能是一個(ge) 問題 (21-24)。我們(men) 建議如下:
我們(men) 建議如下:
參與(yu) 者在樣本采集前 45 分鍾內(nei) 不應刷牙 (23)。
樣本采集前 24 小時內(nei) 不應進行牙科工作。
研究參與(yu) 者應該接受口腔健康問題或損傷(shang) 的篩查。
明顯被血液汙染的唾液樣本應丟(diu) 棄並重新收集(22)。
從(cong) 口腔健康問題高風險人群采集的樣本可以使用 Salimetrics 血液汙染檢測試劑盒(Salimetrics 項目 1-1302;1-1302-5)進行篩查。
所使用的收集協議與(yu) 待測試的分析物兼容至關(guan) 重要。有些分析物隻能用被動滴液收集的樣品進行測試。使用拭子測量這些分析物可能會(hui) 導致所測量的分析物回收率過高或過低。
並非所有拭子都是一樣的。我們(men) 建議使用經過驗證可用於(yu) 測量目標分析物的拭子。一些製造商擁有專(zhuan) 門針對皮質醇的拭子,並且僅(jin) 針對皮質醇的測量進行了驗證。使用此拭子測量另一種激素(例如睾酮)可能會(hui) 導致錯誤的結果。使用棉花作為(wei) 拭子材料已在文獻中被證明是可變結果的來源,如果需要一致的結果且不被生物材料混淆,則不推薦使用棉花。 Salimetrics 已證實,來自棉花采集設備的數據通常與(yu) Shirtcliff、EA 等人的論文(2001 年)被廣泛引用的相匹配。然而,基於(yu) 棉花的方法也會(hui) 增加變異性,並提供與(yu) “真正的被動流口水"值顯著不同的數據結果,如下圖所示;
通過 SalivaBio 口腔拭子測量收集的唾液樣本與(yu) 通過被動流口水獲得的樣本非常接近。 N=10
在樣品采集之前研究並遵循基本分析物穩定性和儲(chu) 存建議至關(guan) 重要。僅(jin) 使用高質量聚丙烯收集管和小瓶來儲(chu) 存樣品。聚苯乙烯或其他未經驗證的塑料管可能會(hui) 對分析物的測量值產(chan) 生不利影響。所有SalivaBio 收集管和小瓶均由優(you) 質聚丙烯製成。
Salimetrics 建議所有樣品在采集後立即冷凍。然而,如果這是不可能的,研究人員應該考慮:
一些不穩定的分析物在室溫下會(hui) 快速變化(即肽和蛋白質)
對於(yu) 某些分析物,例如(脫氫表雄酮、黃體(ti) 酮、雌二醇),應盡量減少凍融循環
Salimetrics是一家全球著名的唾液生物學研究領域專(zhuan) 業(ye) 產(chan) 品供應商,其在唾液的收集方法、生物學性質及其(唾液中各生物組分的含量)定量檢測技術擁有絕對的研發與(yu) 產(chan) 品供應優(you) 勢。作為(wei) 唾液生物學研究及診斷試劑盒應用領域的行業(ye) 標準,其供應的唾液手機方案及唾液成分的ELISA檢測試劑盒均專(zhuan) 門唾液的理化性質所設計,可確保客戶在科學研究或臨(lin) 床診斷中得到穩定、準確的唾液生物學信息,並同時具有操作簡便、結果精確可靠、可重複性高、耗時少等諸多優(you) 點。Salimetrics的唾液檢測實驗室及擁有豐(feng) 富的唾液生物學研發經驗的專(zhuan) 業(ye) 團隊可以為(wei) 廣大客戶提供唾液生物學研究及診斷應用的專(zhuan) 業(ye) 指導。