細胞培養(yang) 是一種不斷發展的實踐,對再生醫學產(chan) 生巨大影響。細胞培養(yang) 過程依賴於(yu) 對影響培養(yang) 結果的培養(yang) 條件的精確調整。每種細胞類型都需要一組特定的信號才能有效生長。此外,所有細胞類型都需要基本營養(yang) 物質和培養(yang) 基成分。因此,一些培養(yang) 基成分是通用的,而另一些則根據細胞類型而特定。
這是維持細胞增殖的通用培養(yang) 基成分列表。
能量:來自碳水化合物或糖,是維持細胞新陳代謝所必需的。
必需金屬和礦物質:例如鈣、鎂、鐵和其他微量金屬是調節代謝途徑和細胞過程所必需的。
緩衝(chong) 劑:磷酸鹽、醋酸鹽和檸檬酸鹽維持 pH 水平,中和代謝活動產(chan) 生的酸化。
營養(yang) 素:由維持細胞途徑和信號傳(chuan) 導所需的蛋白質(或其組成部分:肽和氨基酸)或生長因子組成。培養(yang) 基的這種成分根據細胞類型而變化,並且可以根據特定需要進行定製。下麵概述了一些主要細胞類型及其所需營養(yang) 的詳細信息。
培養(yang) 基還可能含有其他成分,例如 pH 變化指示劑、選擇性抗菌劑和促進細胞培養(yang) 實踐的膠凝劑。雖然這些培養(yang) 基成分不直接影響細胞增殖,但會(hui) 影響細胞培養(yang) 性能。
多能幹細胞可以自我更新,並且可以分化成幾乎任何其他細胞類型,包括神經元、心血管細胞、肝細胞、上皮細胞等。iPSC是一種特定的幹細胞類型,是通過將體(ti) 細胞重編程為(wei) 多能幹細胞狀態而產(chan) 生的。生長因子影響 iPSC 的增殖或分化行為(wei) 。 FGF2 發出 iPSC 作為(wei) 未分化細胞增殖的信號。
FGF2調節絲(si) 裂原激活蛋白激酶 (MAPK)/細胞外信號調節激酶 (ERK) 通路 [ 2 ],這些通路對於(yu) 細胞信號級聯反應至關(guan) 重要,包括調節細胞增殖和分化的信號級聯反應。 FGF2 減少自發分化,從(cong) 而維持可無限擴增的 iPSC 培養(yang) 物。因此,FGF2 是維持 iPSC 培養(yang) 的關(guan) 鍵生長因子。
神經元是一種重要的細胞類型,可以發送信息來控製整個(ge) 身體(ti) 的基本功能。神經元通常存在於(yu) 腦組織中,可以由幹細胞產(chan) 生。多能細胞首先分化為(wei) 神經祖細胞(NPC),進一步分化為(wei) 神經元。 iPSC 衍生的 NPC 隨後可用於(yu) 構建 3D 結構圖案,例如大腦類器官。生長因子信號傳(chuan) 導維持神經元生長並指導生成的神經元類型。 BDNF 和 GDNF 是神經元分化和增殖的兩(liang) 種關(guan) 鍵生長因子。
BDNF激活多種途徑,包括 MAPK、磷脂酶 Cy 和磷脂酰肌醇 3 激酶途徑,調節神經元存活和分化所需的蛋白質轉錄。 [ 3 ]。 BDNF 促進神經元存活、軸突伸長和分支、樹突棘形成和神經元可塑性。
GDNF激活促進細胞增殖的通路,包括 MAPK、磷酸肌醇 3-激酶、ERK 和 ATK 通路 [ 4 ]。 GDNF 促進多巴胺能神經元、運動神經元和皮質神經元的存活,並增強背根神經節的軸突伸長和分支。
BDNF 和 GDNF 用於(yu) 將 iPSC 和 NPC 分化為(wei) 神經元並維持高質量的後代。這些生長因子還可用於(yu) 維持 3D 神經元類器官並顯著驅動類器官圖案化。
RPE 細胞是在眼睛感光層後麵發現的單層細胞。它們(men) 執行許多支持神經元視網膜上的感光細胞的功能,包括類維生素A的轉換和儲(chu) 存、散射光的吸收、微環境的維持和營養(yang) 的提供[ 5 ]。 RPE 細胞以單層形式生長,一旦生長填滿其邊界區域,就可以長時間保持靜止狀態。這使得 RPE 細胞能夠承受高壓力條件。
FGF2通過上述 iPSC 途徑促進 RPE 細胞增殖。EGF激活多種途徑,包括 ERK MAPK、AKT-PI3K 和 PLC-γ1-PKC 途徑,調節增殖並防止不必要的細胞凋亡 [ 6 ]。這使得 EGF 能夠確保 RPE 細胞在靜止期存活。 FGF2 和 EGF 是維持 RPE 細胞並為(wei) 其生長創造壓力最小的環境的關(guan) 鍵生長因子。在特定條件下生長的 RPE 細胞現在被移植以治療黃斑變性。