CleanPlex ®是一種超可擴展且超靈敏的NGS 擴增子測序技術。它具有高度先進的專(zhuan) 有多重 PCR 引物設計算法、極其均勻的多重 PCR 擴增化學物質 和 創新的背景清潔化學物質。它們(men) 共同使得 CleanPlex 即用型和定製 NGS 麵板能夠突破傳(chuan) 統的基於(yu) 擴增子和基於(yu) 混合捕獲的目標富集技術的限製。
功能亮點:
超高的擴增均勻性和超低的PCR背景噪音(更準確的變異調用或更低的測序成本)
單管 3 小時工作流程,手動操作時間最少(輕鬆自動化)
兼容困難樣品(降解的FFPE DNA、FFPE RNA、cfDNA、cfRNA)和主要測序平台(Illumina、Ion Torrent、Genapsys、MGI DNBSeq)
高的靈敏度(低至單細胞水平直接擴增*)
出色的麵板大小可擴展性,單個(ge) 多重 PCR 池中的擴增子數可達 20,000 多個(ge)
檢測和分析單核苷酸變異(SNV)、小插入和缺失(Indels)、拷貝數變異(CNV)、基因融合/剪接變異、基因表達水平、腫瘤突變負荷(TMB)、微衛星不穩定性(MSI)、內(nei) 部串聯複製(ITD)等
以下是從(cong) DNA 提取到測序數據分析的高級靶向測序工作流程(圖 1)。目標富集和文庫製備工作流程(步驟 2)至關(guan) 重要,通常決(jue) 定測序數據的質量。
以下是 CleanPlex DNA 擴增子測序文庫製備的典型工作流程(圖 2)。 CleanPlex DNA 工作流程涉及 3 個(ge) 簡單步驟,每個(ge) 步驟包括熱循環或孵育反應,然後使用磁珠進行文庫純化。簡化的方案僅(jin) 需 3 小時即可完成。在步驟 1 中,在多重 PCR 反應中擴增感興(xing) 趣的靶標。在步驟 2 中,引物二聚體(ti) 、非特異性 PCR 產(chan) 物和複雜的分子碎片在具有創新和專(zhuan) 有 CleanPlex 背景清潔化學的消化反應中被生化去除。在步驟 3 中,通過 PCR 索引反應為(wei) 文庫添加樣本索引條形碼。輸入材料可以是基因組 DNA 和從(cong) FFPE、新鮮/冷凍組織或血液活檢中提取的 DNA。通過在前麵添加逆轉錄步驟,輸入材料也可以是RNA。 (圖3)