緩衝(chong) 液是弱酸與(yu) 其共軛堿、或者弱堿與(yu) 其共軛酸的溶液。在分析化學應用中,如果樣品包含酸性或堿性官能團,反相高效液相色譜(RP-HPLC)通常會(hui) 使用緩衝(chong) 液。這類緩衝(chong) 液可減輕氫/水合氫和氫氧根離子的影響,從(cong) 而降低pH波動。
基於(yu) 緩衝(chong) 類型、離子強度和pH正確選擇緩衝(chong) 液,是離子分析物RP-HPLC方法開發最關(guan) 鍵的步驟。RP-HPLC中離子分析物的保留率主要受流動相pH影響。因此,RP-HPLC流動相pH控製是確保分析物有效分離最重要的參數之一。
二氧化矽類色譜柱反相分離常用pH值範圍為(wei) 2到8。此外,由於(yu) 緩衝(chong) 液在其pKa值下的pH控製效果佳,故其pKa必須接近所需的pH值。一般來說,最好選擇 pKa 值小於(yu) 所需流動相 pH 值 2 個(ge) 單位的緩衝(chong) 液。我們(men) 提供各種 pH 值範圍的 HPLC 級緩衝(chong) 液,可滿足您實驗室的所有色譜應用需求。
HPLC實驗所用流動相添加劑(緩衝(chong) 液、鹽、酸和堿)及有機溶劑質量必須適合檢測器靈敏度和洗脫方案。為(wei) 實現理想的色譜分離效果,建議使用高質量溶劑和試劑。
必須根據色譜柱外殼材料和固定相性質選擇緩衝(chong) 液組成及流動相pH值,避免損壞色譜柱硬件和柱床。
緩衝(chong) 液好溶於(yu) 水且不會(hui) 沉澱。將緩衝(chong) 液與(yu) 有機溶劑混合時,必須謹慎選擇緩衝(chong) 液濃度,避免因濃度過高而形成沉澱。否則可能造成泵運行問題,引起HPLC色譜柱堵塞。
與(yu) 固定相相互作用弱的洗脫液今可從(cong) 色譜柱上洗脫弱吸附分析物,而強相互作用洗脫液則可洗脫強吸附樣品分子。不同溶劑的洗脫或溶劑強度主要取決(jue) 於(yu) 所用固定相的類型。除洗脫強度之外,緩衝(chong) 液粘度和紫外線吸收率也對HPLC分析適用性存在重要影響。