Duolink® 原位精簡操作指南

2.

一抗將一抗在適當的緩衝(chong) 液中稀釋，並添加至樣品中。
孵育
在合適的緩衝(chong) 液清洗兩(liang) 次，每次5分鍾

3.

將兩(liang) 份PLA®探針，以1：5的比例在適當的緩衝(chong) 液中稀釋，並添加至樣品中。
+37 °C孵育60分鍾用1 x洗滌液A清洗2次，每次5分鍾

4.

在H2O中以1：5的比例稀釋連接儲(chu) 液。

在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶並將混合物添加至樣品中。

+37 °C孵育30分鍾用1 x洗滌液A清洗2次，每次2分鍾

5.

在H2O中以1：5的比例稀釋擴增儲(chu) 液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶並將混合物添加至樣品中。
+37 °C孵育100分鍾用1 x洗滌液B清洗2次，每次10分鍾用0.01x洗滌液B清洗1分鍾

6.

成像準備使用含有DAPI的Duolink原位封固劑加載樣品，等待15分鍾，然後在熒光或共聚焦顯微鏡下進行分析。

注意：

• 使用沒有蓋玻片的開放液滴反應，並在加濕室中進行所有孵育。

• 請使用冷凍塊將酶從(cong) 冷凍室（-20ºC）中取出。

• 應在搖床上以最小體(ti) 積（70毫升），並輕微搖晃進行清洗。