質譜分析指南

一、什麽(me) 是質譜儀(yi) ？

質譜儀(yi) 是一種奇特的秤。當然，它比常規實驗室秤精確得多，但它具有相同的目的。當您將某些東(dong) 西放入質譜中時，您最終會(hui) 得到一個(ge) 質量列表及其數量指示。

    MS 分析示例。機器記錄樣品中分子的質量/電荷 (m/z) 比。在此圖像中，您可以看到主要離子的 am/z 比為(wei) 528.8371。值得注意的是，該機器非常靈敏，您可以看到分子的同位素分布。

在現代質譜儀(yi) 中，分子將依次遇到三個(ge) 主要組件：離子源、質量分析儀(yi) 、檢測器。

  1.離子源 – 離子源有多種類型，但我們(men) 不會(hui) 在這篇博文中深入討論，敬請關(guan) 注。為(wei) 了基本理解機器，您需要記住的一件事是，這是分子將被電離（或獲得電荷）的地方。

  2.質量分析儀(yi) ——同樣，質量分析儀(yi) 有多種，但它們(men) 的目的是相同的：使用電流根據分子的質量過濾和分離分子。

  3.檢測器 – 檢測器是質譜儀(yi) 的最後一個(ge) 組件。它的作用是檢測電離分子產(chan) 生的電流，並使用不同的策略將其轉化為(wei) 質量。

二、什麽(me) 是串聯質譜法？

您可能也已經看到，術語“串聯質譜法"或 MS/MS 是指研究目標分子片段而不是分子本身的質譜技術。進行 MS/MS 實驗時，我們(men) 使用質譜儀(yi) 中的能量來分解我們(men) 想要研究的分子。結果是許多較小的分子片段，我們(men) 可以量化或使用它們(men) 來識別母體(ti) 分子。  

串聯質譜通常用於(yu) 減少獲得汙染目標分子信號的幹擾化合物的機會(hui) ！

這背後的理論是，兩(liang) 個(ge) 具有相同質量和相同碎片的分子的機會(hui) 比兩(liang) 個(ge) 具有相同質量的分子的機會(hui) 要小。

三、質譜儀(yi) 可以做什麽(me) ？

通過適當的質譜，您可以識別和/或量化幾乎任何可電離的物質。例如，如前所述，您可以獲得非常精確的分子定量，甚至達到每毫升亞(ya) 皮克的水平。通過稱為(wei) SWATH的無標記LC-MS/MS的方法，還可以對數千種蛋白質進行相對定量 ，每個(ge) 樣品隻需進樣 3 次。或者，您可以獲得化合物的精確質量，用於(yu) 質量控製或研究目的。

四、如何使用質譜法？

進行質譜分析的方法有很多不同。您會(hui) 看到，不同的質譜技術需要不同的樣品製備方案和注意事項。此外，即使我們(men) 堅持使用一種質譜技術（例如 LC-MS/MS），也可以通過多種方法來查看樣品。例如，如果您隻想觀察少數分子並獲得非常精確的定量，則必須從(cong) 包含它們(men) 的基質中提取感興(xing) 趣的分子，清潔它們(men) ，將它們(men) 送入分離柱，使用 MRM 等定向采集方法對其進行分析並獲得數據報告。然而，如果您想要從(cong) 細胞提取物中鑒定數千種蛋白質，那麽(me) 製備物、LC、並且 MS/MS 方法可能會(hui) 有所不同。但如果我必須描述我們(men) 通常如何確定如何使用 MS，它會(hui) 是這樣的：

 1.確定您想要通過 MS 查看的內(nei) 容。蛋白質？代謝物？脂質？其他？

 2.確定適合您需求的質譜技術或谘詢專(zhuan) 家

 3.使用適當的方案從(cong) 基質中提取並純化分子

 4.在質譜儀(yi) 上建立良好的采集方法

 5.執行采集和數據分析

 6.生成清晰的數據報告

五、何時或為(wei) 何使用質譜？

當您的實驗需要精度和/或分辨率時，您可以使用質譜法。此外，對於(yu) 某些應用，您不必依賴試劑盒或抗體(ti) 的可用性來進行研究。

六、GC-MS、LC-MS和CE-MS之間有什麽(me) 區別？

MS 前麵的 GC、LC 和 CE 是指分析物進入質譜之前的不同分離方法。在這些情況下，GC 代表氣相色譜法，LC 代表液相色譜法，CE 代表毛細管電泳。

七、質譜法是定量的嗎？

是的，MS 可以是定量的。為(wei) 此，操作員將選擇一種可以量化您感興(xing) 趣的分子的采集方法。值得注意的是，這種量化可以是絕對的，也可以是相對的。

八、質譜準確嗎？

準確。同樣，這取決(jue) 於(yu) 負責分析的團隊的技能，但總的來說，MS 是可用的最準確的檢測/定量方法之一。它還可能取決(jue) 於(yu) 您使用的儀(yi) 器。打個(ge) 簡單的比方，如果您在 90 年代的電視或全新的 OLED 4K UHD 電視上觀看您喜愛的電影，您將不會(hui) 獲得相同的圖像質量。這同樣適用於(yu) 質譜儀(yi) 。如果您使用低分辨率質譜儀(yi) ，您可能會(hui) 得到比全新高分辨率儀(yi) 器更模糊的結果。

九、質譜儀(yi) 有多靈敏？

取決(jue) 於(yu) 您感興(xing) 趣的分子及其所在的基質。

對於(yu) 定量方法，服務提供商通常會(hui) 建立感興(xing) 趣分子的線性檢測範圍，並嚐試將測試樣品納入範圍內(nei) 。

為(wei) 此，我們(men) 可以按原樣使用樣品，或者濃縮/稀釋樣品以使其進入線性範圍。因此，對於(yu) 質譜儀(yi) 來說，濃度太高或太低的物質並不多。

十、質譜法貴嗎？

它可能看起來像，但事實並非如此。考慮到您可以從(cong) 質譜分析中擠出的一切，它可能是比經典分子生物學技術更好的投資。MS 本身除了給出樣品中某種物質的質量和含量外，並不能做更多的事情。然而，當你將它與(yu) 其他技術結合起來時，它可能會(hui) 物有所值。

例如，在一次注射中，MS 可以提供有關(guan) 您感興(xing) 趣的蛋白質的每個(ge) 相互作用夥(huo) 伴的定量信息，或者通過提供幾種代謝物的定量來提供藥物代謝的定量信息。因此，在一次實驗中，您可能可以將獲得的結果數量增加很多。