Q: 應該如何儲(chu) 存和解凍血清才不會(hui) 使產(chan) 品質量受損? A: 建議 血清應保存在-10℃及以下。若一次無法用完一瓶,無菌分裝血 清至恰當的滅菌容器內(nei) ,再放回冷凍。解凍時,建議將血清從(cong) 冷 凍室先移至2-8℃冰箱解凍,再放置於(yu) 室溫進行解凍。請注 意,解凍過程中需要經常搖晃混合。嚴(yan) 禁將FBS 在37℃長時間孵 育解凍。
Q: 培養(yang) 基中添加了血清和抗生素後,可長期保存嗎? A: 一旦 您在新鮮培養(yang) 基中添加了血清和抗生素時,您應該在2周內(nei) 使用它。
Q: 如果我的FBS到達時已經部分解凍,還能使用嗎? A: 所有的 依科賽生物ExCell Bio血清都在冰凍狀態下由幹冰運輸,因此您 收到時應該仍是冰凍狀態。如果隻是部分解凍, FBS仍然可以使 用,但是建議先將FBS在冰箱中充分解凍,之後溫和的搖晃搖勻,
再移至-10℃及以下進行儲(chu) 存。
Q: 不同批次血清顏色為(wei) 什麽(me) 有差異? A: 血清中含有微量的血 紅蛋白,與(yu) 采集血液過程中血細胞的破裂數目有關(guan) ,隻要血紅蛋 白的含量在藥典規定範圍內(nei) ,顏色的深淺和血清品質無關(guan) ,不影
響細胞培養(yang) 。中國藥典規定血紅蛋白含量≤200mg/L。
Q: 熱滅活是必須的嗎?A: 實驗顯示,熱滅活對大多數的細胞 而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促 進,或全沒有任何作用,甚至通常因為(wei) 高溫處理影響了血清的 質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活的血清,會(hui) 增 加沉澱產(chan) 生的概率,這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小 黑點",常常會(hui) 讓研究者誤以為(wei) 是血清遭受汙染。熱滅活過程中 局部溫度過高,搖晃不均勻,滅活時間過長,都會(hui) 造成血清品質 下降。若非必須,可以不需要做熱滅活這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!
Q: 血清使用前是否有必要熱滅活,如何熱滅活? A: 請先確認 細胞培養(yang) 實驗方案是否需要對血清進行熱滅活。 一般不建議熱滅 活,熱滅活處理會(hui) 損失血清中部分營養(yang) 成分,並且容易發生蛋白 質聚集沉澱;少數對補體(ti) 敏感的實驗需要(如某些免疫學實驗,
腺病毒包裝,某些PS培養(yang) 等),可酌情使用熱滅活血清。熱滅活方法:血清全解凍充分搖勻後置於(yu) 56°水浴中30分鍾
Q: 細胞培養(yang) 中出現黑點是汙染嗎?如何處理? A: 一旦您在細 胞培養(yang) 的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yang) 基是否 渾濁,然後在鏡下觀察培養(yang) 細胞生長的狀態,黑點是否遊動。如 果細胞被汙染,微生物則會(hui) 大量繁殖,培養(yang) 基就會(hui) 迅速變黃、變 渾濁。汙染包括細菌汙染、支原體(ti) 汙染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與(yu) 黑點出現前相比,沒有任何變化,那麽(me) ,
黑點的出現可能與(yu) 以下幾種情況有關(guan) :①細胞生長過老,破碎的 細胞殘骸;②配製培養(yang) 基的pH 值偏高,不宜細胞生長;③培養(yang) 原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳(chuan) 代可以消除;④血清等級不足以維持細胞良好的生長。
Q:FBS 中含有的絮狀物是什麽(me) 東(dong) 西? A:FBS 中的絮狀物可能由 很多種原因造成,其中最常見的沉澱主要成分是纖維蛋白和脂蛋 白,不會(hui) 影響血清品質,沉澱若需去除,視沉澱大小500-1000×g,離心5-10min去除,也可不做處理。
Q: 為(wei) 什麽(me) 要使用正規進口的血清? A:① 有的血清缺乏檢驗檢 疫監管,冷鏈運輸無法保障,嚴(yan) 重影響血清批內(nei) 和批間穩定性, 實驗數據結果不可控;②正規的血清來源於(yu) 中華人民共和國海關(guan) 總署允許進口的非疫區國家,防止未經檢疫的血液製品中可能攜帶傳(chuan) 染性物質, 一旦流入境內(nei) ,可能會(hui) 對試者和研究人員的生命健康造成威脅。