成功傳代的方法——解離法

在開發特定細胞係的培養(yang) 條件時需要考慮許多參數。我們(men) 都知道 pH 平衡、氧氣水平和血清濃度是影響培養(yang) 成敗的重要變量。然而，包括與(yu) 細胞需求相匹配的解離方法的傳(chuan) 代方案也同樣重要。考慮到這一點，我們(men) 將回顧一些常見解離實踐背後的原則，以幫助您根據細胞係的具體(ti) 性質定製方法。

懸浮生長的細胞易於(yu) 傳(chuan) 代培養(yang) 。隻要在細胞耗盡營養(yang) 供應之前將細胞稀釋到合適的新鮮培養(yang) 基中，它們(men) 就會(hui) 表現得很好。另一方麵，單層生長的細胞彼此之間以及與(yu) 培養(yang) 皿之間形成蛋白質接觸。在將細胞懸浮在培養(yang) 基中、離心並重新鋪板之前，必須先將這些物質破壞。因此，必須特別考慮以確保解離條件破壞細胞接觸而不殺死細胞。

胰蛋白酶有時（但並非總是）是答案

在決(jue) 定解離條件時，研究者應考慮細胞形成的鍵的類型。一些貼壁細胞係僅(jin) 形成微弱的接觸，隻需將培養(yang) 瓶敲擊手掌或將培養(yang) 瓶敲擊台麵即可破壞接觸。其他貼壁細胞係，特別是那些源自上皮的細胞係，會(hui) 形成牢固的多蛋白緊密連接，隻能通過酶消化來破壞；在這些情況下，通常使用胰蛋白酶（一種絲(si) 氨酸蛋白酶）。源自上皮的細胞還可以表達鈣粘蛋白，其介導非常強的鈣依賴性粘附或橋粒連接。在這種情況下，可能需要添加鈣螯合劑（如 EDTA）來隔離鈣，以有效地解離細胞。

優化解離後的活力

為(wei) 了優(you) 化解離後的細胞活力，反應條件應與(yu) 細胞接觸的強度相匹配。例如，如果標準胰蛋白酶/EDTA 消化（通常為(wei) 0.05%-0.5%）不能有效消化細胞鍵（10-15 分鍾內(nei) ），則可能很難在細胞開始死亡之前將其從(cong) 平板上移除，並且細胞活力也會(hui) 受到影響。將會(hui) 受到不利影響。在這種情況下，可能需要更高濃度的胰蛋白酶/EDTA 或其他酶，例如膠原酶。另一方麵，如果反應過於(yu) 劇烈，細胞可能會(hui) 裂解或失去重新附著到平板上所需的表麵蛋白，這兩(liang) 種情況都會(hui) 導致活力降低。此外，裂解的細胞會(hui) 釋放基因組 DNA，導致活細胞聚集，使存活細胞更難重新鋪板，因此需要添加 DNase。

準備是良好解離的關鍵

如果您已將反應強度與(yu) 細胞係的粘附特性相匹配，但您的細胞仍然難以去除，您可能會(hui) 發現問題在於(yu) 細胞準備解離的方式。生長培養(yang) 基中可能存在抑製胰蛋白酶的成分，例如血清，但這可以通過簡單地用Dulbecco PBS衝(chong) 洗細胞一到兩(liang) 次來克服 （不含鈣或鎂）在添加解離試劑之前。也可能是細胞保持匯合的時間太長。在這些條件下，細胞可能會(hui) 形成異常牢固的細胞-細胞和細胞-表麵連接，並且異常難以破壞。出於(yu) 這個(ge) 原因，以及為(wei) 了培養(yang) 物的整體(ti) 健康，建議細胞在達到 100% 匯合（即 70-90% 匯合）之前進行傳(chuan) 代。

結論

有了對解離試劑如何工作的基本了解，研究人員可以開發一種優(you) 化的方案，同時考慮細胞粘附特性的強度和質量。細胞解離的優(you) 化方案將確保成功傳(chuan) 代並延長細胞在培養(yang) 物中的壽命。