幹細胞培養(yang) 中需要 FGF2(也稱為(wei) FGF-basic 或 bFGF)來維持幹細胞處於(yu) 未分化和多能狀態。然而,FGF basic 不穩定,需要每天更換培養(yang) 基並添加新的 FGF basic,這是昂貴、乏味且耗時的。為(wei) 了克服這個(ge) 問題,開發了 FGF basic 的熱穩定版本,以支持 2 天介質更換協議,而不是每日介質更換。為(wei) 期 2 天的培養(yang) 基更換方案使幹細胞研究人員無需在周末返回實驗室,使其成為(wei) 幹細胞研究人員的理想選擇。耐熱 FGF2 經過精心設計,可增強在培養(yang) 基中的穩定性,而不影響其生物學功能。
當在 37° 的典型幹細胞培養(yang) 基中培養(yang) 時,培養(yang) 2 天後,相當數量 (35%) 的熱穩定 FGF2 (SPEED SKU# SDP1025) 在培養(yang) 基中保持完整,而常規 FGF2 (SPEED SKU# YCP1143)第一天後就無法檢測到。結果表明,熱穩定 FGF2 的降解速度比常規 FGF 堿性慢約 3 倍。
當暴露於(yu) 胰蛋白酶時,FGF2 在 4.5 小時後顯著降解,而 FGF2-TS(熱穩定)水平僅(jin) 略有降低。值得注意的是,肝素可保護 FGF2 和 FGF2-TS 免受胰蛋白酶消化。與(yu) FGF basic 相比,熱穩定 FGF basic 更能抵抗蛋白水解降解。
采用兩(liang) 天喂養(yang) 方案,無論細胞是人胚胎幹細胞(hESC)還是誘導多能幹細胞(iPSC),幹細胞的多能性在傳(chuan) 代10次後都能得到有效維持;使用非酶傳(chuan) 代溶液 (XFPS) 或使用膠原基試劑 (CG) 進行傳(chuan) 代;在化學成分確定的基質 (XFM) 或基質膠 (MG) 中培養(yang) 。通過對幹細胞標記物(包括 SSEA-4、Tra1-60、Tra1-81 和 Oct3/4)進行細胞計數分析來證實多能性。
通過兩(liang) 天的喂養(yang) 方案,iPSC 細胞培養(yang) 物即使在傳(chuan) 代 10 次後仍保持健康的生長特性。下圖分別顯示了培養(yang) 第2天和第6天的iPS細胞。
幹細胞培養(yang) 物在長期培養(yang) 過程中會(hui) 出現遺傳(chuan) 異常。在使用 10 mg/mL FGFbasic-TS 的 2 天喂養(yang) 計劃中,iPS 細胞係在第 10 次傳(chuan) 代後在核型分析中保持正常。