如何定量檢測cAMP和cGMP

在五十年的研究曆程中，從(cong) 開始研究cAMP，cGMP在各種生理過程中的調節作用，到近幾年與(yu) 之相關(guan) 的藥物研發，藥物篩選領域，人們(men) 一直在努力尋找一種快速、靈敏、特異性和可重複地定量檢測cAMP和cGMP含量的方法。

檢測方法演變

cAMP，cGMP分子量分別隻有329.21和345.21，在機體(ti) 內(nei) 的含量極低，為(wei) p mol/L級別，用一般的分析方法無法測定。70年代一係列測定cAMP和cGMP的方法被發明出來，最基本的原理有三種：分別是競爭(zheng) 性蛋白質結合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄層色譜法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了廣泛的應用和改進，由於(yu) 這種方法采用放射性核素標記，應用範圍受到一定限製，為(wei) 了進一步提高檢測的靈敏度和操作的安全性，進入90年代又陸續發明了各種酶標記法和化學發光法的競爭(zheng) 性ELISA檢測試劑盒，這一類檢測方法的根本原理都是基於(yu) 抗體(ti) 抗原的免疫反應，所有這些試劑盒中采用的抗體(ti) 全部是兔抗血清或者是經過特異親(qin) 和提純之後的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫無疑問，兔多抗在約四十年的cAMP，cGMP定量檢測中做出了巨大貢獻，但同時它也有著明顯的缺陷：

1，兔多抗對cAMP，cGMP的特異性不高，會(hui) 與(yu) 其他核苷類似分子發生交叉反應，盡管可以通過特異親(qin) 和提純降低交叉，但仍然無法消除交叉；

2，兔多抗對cAMP和cGMP的親(qin) 和力受高濃度的二價(jia) 陽離子（比如Mg²⁺和Ca²⁺）的影響；

3，兔多抗在製備的過程中存在個(ge) 體(ti) 差異和批間差異，難以保證檢測數據的重複性；

4，兔多抗試劑盒在cAMP，cGMP樣品的處理上也需要進行乙酰化處理，這與(yu) 兔多克隆抗體(ti) 製備方法有必然關(guan) 係，如果不乙酰化將無法達到檢測所需的靈敏度。

所以無論標記方法如何革新，不改進抗體(ti) ，仍然不能從(cong) 根本上迎來cAMP，cGMP定量檢測的變革。

cAMP和cGMP單克隆抗體(ti) 成功開發

NewEast Biosesciences（紐斯特）公司的科學家經過兩(liang) 年的研發，篩選了4萬(wan) 多個(ge) 克隆，終於(yu) 從(cong) 中發現了高特異性，高親(qin) 和力的cAMP和cGMP單克隆抗體(ti) 。並成功構建了基於(yu) 單抗的cAMP和cGMP ELISA檢測試劑盒。這個(ge) cAMP（cGMP）單抗對非乙酰化的cAMP（cGMP）的特異性識別能力是其對cGMP（cAMP）、ATP（GTP）以及其他核苷類似物識別能力的10⁸倍以上，這相比於(yu) 以往的多抗試劑盒大大提高了cAMP (cGMP) 檢測的靈敏性和特異性，並且極大的降低了試劑盒的批間差異，提供了長久有效地可重複性檢測，也擺脫了繁瑣的乙酰化過程和對科研人員健康不利的乙酰化揮發試劑。