TFIIF是一種由兩(liang) 個(ge) 保守亞(ya) 基組成的通用轉錄因子，可與(yu) RNA聚合酶II （RNAPII）緊密結合，調節真核生物中信使RNA的合成。在此，結合了電子顯微鏡(EM) 和福斯特共振能量轉移的混合方法(FRET) 被描述並用於(yu) 定位 RNAPII-TFIIF 結構中第二個(ge) TFIIF 亞(ya) 基 (Tfg2) 的 C 末端。在第一階段，附加到 Tfg2 C 末端的多聚組氨酸標簽用鎳-NTA 納米金進行標記，並設計了七步單粒子 EM 方案以獲得納米金可在 3D 中訪問的區域，表明 Tfg2 C -末端靠近RNAPII的夾子。接下來，選擇與(yu) 夾子相鄰的RNAPII的Rpb2和Rpb4亞(ya) 基的C端放置FRET衛星以實現納米定位（NP）分析，從(cong) 而提高定位精度，使得Tfg2 C發現-末端駐留在夾脊上，但在轉錄過程中可以移動到夾頂部。因為(wei) 接受 EM 或 FRET 探針的標簽可以很容易地引入到任何蛋白質亞(ya) 基，這種混合方法通常適用於(yu) 補充許多蛋白質複合物的納米精度冷凍電鏡研究。

混合技術利用 Ni-NTA-Nanogold®

闡明亞蛋白結構，
揭示關鍵基因轉錄機製

一種新的混合技術結合了 Ni-NTA-Nanogold® 標記、用於(yu) 單顆粒分析的創新雙離焦成像與(yu) 冷凍電鏡以及 FRET——在蛋白質結構繪圖中實現納米級精度。該小組使用這種強大的方法來闡明 DNA 轉錄機製關(guan) 鍵組件的結構和功能，甚至揭示了這些部分在與(yu) DNA 相互作用以物理啟動轉錄時的運動。