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Ancell抗CD64（FcRI）F（ab'）2用於(yu) 阻斷調理血小板的吞噬作用
本研究著眼於(yu) 抗血小板抗體(ti) 糖基化對輸血患者巨噬細胞介導的吞噬清除能力的影響。抗CD64單克隆抗體(ti) 的F（ab'）2用作體(ti) 外吞噬阻斷對照。
“單核細胞來源的巨噬細胞用不同糖基化的抗HLA hIgG1調理的血小板的吞噬作用”Thijs L，Gesture Vidarsson等。
單核細胞來源巨噬細胞用不同糖基化的抗HLA hIgG1調理的血小板的吞噬作用
免疫介導的血小板難治性 （PR） 仍然是血小板輸注情況下的一個(ge) 重大問題，主要由針對 I 類人白細胞抗原 （HLA） 的同種異體(ti) 抗體(ti) 的存在引起。用這些同種抗體(ti) 調理供體(ti) 血小板可通過多種機製（包括抗體(ti) 依賴性細胞吞噬作用 （ADCP））在輸血後快速清除。有趣的是，並非所有同種異體(ti) 免疫患者都會(hui) 對不匹配的血小板輸注產(chan) 生PR，這表明患者之間HLA特異性IgG反應存在差異。以前，我們(men) 觀察到抗HLA抗體(ti) 的糖基化譜在PR患者之間差異很大，特別是在Fc半乳糖基化，唾液酸化和岩藻糖基化方麵。在目前的研究中， 我們(men) 研究了不同Fc糖基化模式對單核細胞來源的人巨噬細胞吞噬調理血小板的影響，已知對補體(ti) 沉積和FcγR結合的影響。我們(men) 發現，單核細胞來源的M1巨噬細胞對抗體(ti) 和補體(ti) 調理的血小板的吞噬作用不受這些定性IgG-聚糖差異的影響。
血小板輸注是一種經常給藥的治療方法，可降低血小板減少症患者的死亡率和出血性並發症。血小板輸注的一個(ge) 主要問題是血小板難治性（PR），這是指多次血小板輸注後血小板計數增加不足。PR 的發病率範圍為(wei) 5%-15%，因患者特征和血小板製品製備而異 [1–4].在大約 20% 的 PR 病例中，血小板清除是免疫介導的，主要是由針對 I 類人白細胞抗原 （HLA） 的同種抗體(ti) 的存在引起，偶爾還有人血小板抗原 （HPA） [5–9].用這些同種抗體(ti) 調理供體(ti) 血小板可在輸血後不久通過抗體(ti) 依賴性細胞毒性 （ADCC）、補體(ti) 依賴性細胞毒性 （CDC） 和/或抗體(ti) 依賴性細胞吞噬作用 （ADCP） 導致清除 [10–16].目前對於(yu) 大量輸血的同種異體(ti) 免疫患者，目前的主要管理策略是廣泛匹配血小板輸注產(chan) 品，以防止 PR 和隨後的更差臨(lin) 床結局 [7–9].有趣的是，並非所有同種異體(ti) 免疫患者都會(hui) 因血小板輸注不匹配而發生 PR [17,18]，提示患者之間HLA特異性IgG反應的定性特征差異。
所有 IgG 分子都含有保守的 N-位於(yu) Fc區位置297的連接聚糖，影響抗體(ti) 的結構和功能。該聚糖由 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和甘露糖殘基，可以通過岩藻糖，平分GlcNAc和最多兩(liang) 個(ge) 半乳糖殘基拉長，兩(liang) 者都可以被唾液酸殘基覆蓋。抗體(ti) Fc糖基化變化很大，之前在感染和同種異體(ti) 免疫的情況下已經描述了改變的模式，已知這些改變會(hui) 影響抗體(ti) 效應功能，從(cong) 而影響相關(guan) 免疫應答的進展[19–27].例如，岩藻糖殘基的缺失導致抗體(ti) 與(yu) FcγRIIIa/b的結合親(qin) 和力增加，這可能導致相關(guan) 效應功能增加，例如ADCC和ADCP [19–22,25,28,29].此外，半乳糖基化與(yu) 補體(ti) 活化特別相關(guan) [21,24,30,31].我們(men) 和其他人最近表明，半乳糖基化通過增強的六聚化增加了抗體(ti) 激活經典補體(ti) 途徑的能力，這反過來又增加了補體(ti) 沉積和CDC活性[23,30].唾液酸化略微增強補體(ti) 活化，進一步增強[21,23,32]，而平分GlcNAc對補體(ti) 活化和FcγR結合均無影響[21].
之前，我們(men) 表征了在接受血小板輸注的血液腫瘤患者中檢測到的抗HLA I類抗體(ti) 的糖基化譜[33]和被診斷為(wei) PR 的患者 [20].抗HLA IgG特異性糖基化譜在患者之間差異很大。對於(yu) 大多數患者，我們(men) 觀察到與(yu) 總IgG相比，HLA特異性IgG的Fc半乳糖基化和唾液酸化增加。此外，少數患者（35 名患者中有 2 名）也產(chan) 生了岩藻糖基化水平極低的抗 HLA 抗體(ti) [33].
在同種異體(ti) 免疫和 PR 的背景下，輸注的血小板主要被認為(wei) 是在用抗 HLA 或 -HPA 同種抗體(ti) 調理後被脾髒中的單核巨噬細胞清除 [8,10,11,13,34,35].存在幾種途徑，其中吞噬細胞可以通過非調理和調理受體(ti) 檢測其吞噬作用靶標。非調理受體(ti) 對於(yu) 識別病原體(ti) 相關(guan) 分子模式（PAMP）和凋亡細胞至關(guan) 重要，而調理受體(ti) 識別用調理素靶向清除的細胞，例如IgG和補體(ti) 成分。識別IgG的最重要和有效的吞噬受體(ti) 是FcγRI（CD64），FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）和補體(ti) 受體(ti) 3（CR3或CD11b / CD18），用於(yu) 識別iC3b和C3d [36,37].脾巨噬細胞具有高表達的CR3，FcγRI，FcγRII和FcγRIII[14,38–41].當血小板被IgG或補體(ti) 成分調理時，血小板變得容易受到脾巨噬細胞表達的吞噬受體(ti) 的結合，從(cong) 而導致隨後的吞噬和破壞。血小板通過脾正弦的緩慢通過進一步增強了這一過程[7,11,14].然而，補體(ti) 係統受累以及血小板內(nei) 在因素（如血小板凋亡和調理作用時活化）最近也被提出與(yu) PR 中血小板存活率降低有關(guan) [12,15,35,42–45].
有趣的是，對於(yu) 抗體(ti) Fc糖基化對巨噬細胞使用不同糖基化的抗HLA同種抗體(ti) 調理作用時血小板清除的影響知之甚少。特別是鑒於(yu) 最近關(guan) 於(yu) 抗體(ti) Fc糖基化對FcγR結合和補體(ti) 沉積的影響的發現，重要的是要更深入地了解抗體(ti) Fc糖基化對同種異體(ti) 免疫時PR中涉及的清除機製的影響。在目前的研究中，我們(men) 研究了已知影響補體(ti) 沉積和FcγR親(qin) 和力的不同Fc糖基化模式對單核細胞來源的人巨噬細胞調理化血小板吞噬的影響。使用單核細胞來源的M1巨噬細胞，因為(wei) 它們(men) 具有高表達水平的FcγR和CR3， 人脾巨噬細胞也高度表達。我們(men) 發現，通過改變Fc糖基化譜增加補體(ti) 沉積和/或FcγRIIIa/b親(qin) 和力並不影響人單核細胞來源的巨噬細胞對IgG調理化血小板的吞噬作用。 體(ti) 外 型。
在書(shu) 麵知情同意後，從(cong) 匿名Sanquin獻血者獲得的血沉棕黃層中分離出單核細胞。血小板是從(cong) 匿名健康誌願者的檸檬全血中分離出來的，並得到知情的書(shu) 麵同意。單核細胞和血小板不是從(cong) 同一個(ge) 個(ge) 體(ti) 獲得的。所有程序均由Sanquin道德谘詢委員會(hui) 批準，並符合赫爾辛基宣言和荷蘭(lan) 法規。
本研究中使用的抗HLA單克隆抗體(ti) 的生產(chan) 和糖工程技術已被詳細描述[46–52].簡而言之，所有抗HLA mAb可變區域的蛋白質序列用於(yu) 組裝編碼全人IgG1和PG LA LA Fc突變體(ti) （P329 G，L234A和L235A）的pcDNA3.1表達載體(ti) ，這些突變體(ti) 不能結合補體(ti) 和FcγR[53].表達載體(ti) 用於(yu) 我們(men) 內(nei) 部HEK Freestyle係統中重組抗體(ti) 的生產(chan) 。為(wei) 了獲得具有某些所需聚糖譜的抗體(ti) ，在轉染之前/期間使用化學抑製劑2-脫氧-2-氟-L-岩藻糖（2FF，碳合成物）來減少fc岩藻糖基化和5 mM D-半乳糖（Sigma Aldrich），並編碼酶β-1，4半乳糖基轉移酶1（B4GALT1）和β-半乳糖苷α-2，6-唾液酸轉移酶1（ST6GALT1）的構建體(ti) ，以增加半乳糖基化和唾液酸化。轉染後6天純化單克隆抗體(ti) ，並進行液相色譜-質譜的IgG Fc糖基化分析[46,47,54].
如前所述，通過IBIS M×96（IBIS技術）上的表麵等離子體(ti) 共振（SPR）評估抗體(ti) 與(yu) 人FcγR類別的結合[55,56].使用連續流動微量觀察儀(yi) （Wasatch Microfluidics）將所有C端生物素化的hFcγR點到單個(ge) SensEye G-鏈黴親(qin) 和素傳(chuan) 感器（Ssens）上，該傳(chuan) 感器允許同時測量每種抗體(ti) 與(yu) 所有hFcγR的結合親(qin) 和力。生物素化的hFcγR以三倍稀釋度點樣，hFcγRIIa-H131，hFcγRIIIa-F158，hFcγRIIIb-NA1和hFcγRIIIb-NA2從(cong) 30 nM到1 nM，hFcγRIIa-R131和hFcγRIIb的稀釋範圍為(wei) 10 nM至0.3 nM，在補充有0.075%吐溫-80（VWR，M126-100 ml），pH 7.4的PBS中，hFcγRIIIa-V158的範圍為(wei) 100 nM至3 nM。每個(ge) 樣品後用10nM Gly-HCl，pH 2.0進行再生。解離常數（KD）使用Rmax = 500的平衡擬合計算。 所有結合數據的分析和計算均使用洗滌器軟件版本2（生物軟件）和Excel完成。
使用CD14+磁性微珠分離（Miltenyi Biotec）從(cong) 血沉棕黃層衍生的PBMC中分離單核細胞，隨後冷凍直至如前所述進一步使用[44,57].采用流式細胞術測定單核細胞純度，為(wei) >90%。單核細胞分化為(wei) 單核細胞來源的巨噬細胞，如所述[58].簡而言之，單核細胞在第0天解凍並在24孔培養(yang) 板（0.25x106 每孔單核細胞）在 IMDM 1640（龍沙）中存在 10 ng/mL 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF、CellGenix），含有 10% 胎牛血清 （Bodinco） 100 U/mL 青黴素和 100 U/mL 鏈黴素（均為(wei) Gibco），CO 為(wei) 5% CO2 37°C. 細胞共培養(yang) 9天，培養(yang) 第3天加入新鮮培養(yang) 基和GM-CSF。
通過離心枸櫞酸全血，從(cong) 富血小板血漿（PRP）中分離出具有已知HLA分型的健康誌願者的血小板 g 20分鍾，使用前麵描述的方法進行優(you) 化以避免血小板活化[12,16].此後，10 體(ti) 積% ACD（酸性檸檬酸鹽葡萄糖，85 mM Na3-檸檬酸鹽·2 H2O， 71 mM檸檬酸·H2O和111mM D-葡萄糖）加入。PRP離心（850 g 8分鍾），並用洗滌緩衝(chong) 液（WB;36mM檸檬酸·H2O，103 mM NaCl，5 mM KCl，5 mM EDTA，5.6 mM D-葡萄糖，pH 6.5）。將血小板濃度設置為(wei) 6×108 PBS中的細胞/ mL，並在室溫下與(yu) 3.75μM PKH26（西格瑪奧爾德裏奇）在輥組上孵育20分鍾。加入10體(ti) 積%FCS終止標記過程，用WB洗滌標記的血小板並重懸於(yu) PBS + 0.5%BSA中。5 × 106 將血小板與(yu) 等體(ti) 積的重組抗HLA抗體(ti) 一起孵育，並在室溫下混合補體(ti) 足夠的人血清30分鍾。對於(yu) 某些條件，將血清在56°C下預孵育30分鍾以滅活補體(ti) 。用PBS + 0.5%BSA + 5 mM EDTA洗滌血小板3次，並重懸於(yu) 巨噬細胞培養(yang) 基中。補體(ti) 沉積（C3b）通過用抗補體(ti) C3b/iC3b-APC抗體(ti) 克隆染色一小部分血小板來評估補體(ti) 沉積（C3b）：3E7/C3b（1/250，生物傳(chuan) 奇）
對於(yu) 吞噬作用測定，將調理的血小板在37°C下與(yu) 同種異體(ti) 巨噬細胞以1：40巨噬細胞：血小板比例孵育30分鍾。對於(yu) 某些條件，將巨噬細胞在室溫下與(yu) 10μg/ mL FcγR封閉抗體(ti) （抗CD16，抗CD32和/或抗CD64）和同種型對照預孵育30分鍾。抗CD64（克隆10.1，阻斷FcγRI）作為(wei) f（ab'）2片段從(cong) Ancell公司訂購，而抗CD32（克隆AT10，阻斷FcγRIIa/b/c），抗CD16（克隆3G8，阻斷FcγRIIIa/b）和同種型（抗生物素）被克隆並生產(chan) 為(wei) hIgG1 N297A P329 G，L234A和L235A，使它們(men) 無法結合C1q和FcγRs [53].此後，用PBS洗滌細胞並使用130mMli多卡因（Sigma Aldrich）和10mM EDTA（默克）收獲。收獲後，將巨噬細胞保持在冰上，並用冰冷的PBS + 0.5%牛血清白蛋白（BSA，Sigma Aldrich）+ 2 mM EDTA（默克）洗滌，隨後用冰冷的PBS洗滌。收獲後，將細胞用3.7%多聚甲醛（Sigma Aldrich）在PBS中固定在室溫下15分鍾。接下來，用PBS + 0.5%BSA洗滌細胞，並使用APC標記的抗HLA-DR（克隆L243，BD Biosesciences）和BV421標記的抗CD42a（克隆ALMA.16，BD Biosesciences）染色20分鍾在PBS + 0.5%BSA的室溫下。用PBS + 0.5%BSA洗滌細胞，並使用BD LSR II流式細胞儀(yi) 和成像流式細胞術（ImageStreamX Mark II成像流式細胞術，默克密理博）進行分析。使用Flowjo v 10.8.1分析流式細胞術數據; 基於(yu) FSC / SSC，單細胞和HLA-DR+對細胞進行門控，之後對PKH26標記的血小板和抗CD42a-BV421（PKH26+ CD42a-：吞噬;PKH+ CD42a+：結合的血小板;補充圖S3A）。使用IDEAS v6軟件分析成像流式細胞術數據，涉及對門細胞的縱橫比強度/麵積Ch01進行門控，隨後對焦點細胞（梯度RMS Ch01）和HLA-DR+細胞進行門控巨噬細胞，之後對PKH26標記的血小板和抗CD42a-BV421陽性細胞進行門控（補充圖S3B）。 使用IDEAS v6軟件分析成像流式細胞術數據，涉及對門細胞的縱橫比強度/麵積Ch01進行門控，隨後對焦點細胞（梯度RMS Ch01）和HLA-DR+細胞進行門控巨噬細胞，之後對PKH26標記的血小板和抗CD42a-BV421陽性細胞進行門控（補充圖S3B）。 使用IDEAS v6軟件分析成像流式細胞術數據，涉及對門細胞的縱橫比強度/麵積Ch01進行門控，隨後對焦點細胞（梯度RMS Ch01）和HLA-DR+細胞進行門控巨噬細胞，之後對PKH26標記的血小板和抗CD42a-BV421陽性細胞進行門控（補充圖S3B）。
統計分析在Windows版GraphPad Prism 8.02（263）中執行。使用普通單因素方差分析和鄧尼特多重比較檢驗分析條形圖。重要性水平設定為(wei) p ≤ .05.*、**、*** 和 **** 表示統計顯著性 p 分別為(wei) <.05、≤.01、≤.001和≤.0001。
為(wei) 了確定抗HLA同種抗體(ti) 的Fc糖基化對補體(ti) 和/或FcγR介導的血小板吞噬作用的影響，建立了監測人單核細胞來源巨噬細胞吞噬血小板吞噬作用的係統。糖基化譜改變的抗HLA單克隆抗體(ti) （mAb）（補充圖S1A-C）如下所述[46,47]並進行基於(yu) 液相色譜-質譜的IgG Fc糖基化分析，以確認預期的糖基化曲線（補充圖S1D）。
將血小板與(yu) 未修飾和糖工程化的抗HLA hIgG1 mAb（SN230G6、SN607D8和W6/32）在補體(ti) 充足血清存在下孵育，從(cong) 而實現抗體(ti) 和補體(ti) 調理。隻有SN230G6和SN607D8抗體(ti) 的組合導致強烈的C3b沉積，盡管泛HLA I類識別W6/32（補充圖S1B）自行引起補體(ti) 沉積（補充圖S1E），與(yu) 我們(men) 之前的觀察結果一致[47].半乳糖基化和唾液酸化升高的抗體(ti) 顯著增強了補體(ti) 沉積。mAb的岩藻糖基化對補體(ti) 沉積沒有影響（補充圖S1E）。PG LALA Fc突變體(ti) ，不能結合C1q和FcγR[53]，也沒有熱滅活血清（HI血清）導致C3b沉積（補充圖S1F）。通過SPR陣列評估了這些糖工程抗體(ti) 與(yu) 人FcγR的結合，證實了FcγRIIIa/b的親(qin) 和力增加，而FcγRIIa/b的親(qin) 和力差異沒有觀察到（補充圖S2）。
調理的PKH26標記的血小板與(yu) 單核細胞來源的M1樣巨噬細胞（圖 1A).這些分化的巨噬細胞表達所有類別的FcγR（FcγRI（CD64），FcγRII（CD32），FcγRIII（CD16））以及CR3（CD11b / CD18）（圖1B），所有參與(yu) 吞噬作用的關(guan) 鍵受體(ti) [8,11,36,37,59].使用成像和常規流式細胞術測定血小板的內(nei) 化（門控策略分別在補充圖S3A和3B中描述）。血小板特異性標誌物CD42a用於(yu) 檢測巨噬細胞外部的血小板（圖1C).大多數血小板陽性（PKH+）巨噬細胞是CD42a-。此外，使用成像流式細胞術顯示，大多數PKH+ CD42a +事件由同時具有吞噬作用（PKH + CD42a-）和結合（PKH+ CD42a +）血小板的巨噬細胞組成，表明總PKH+區室與(yu) 血小板吞噬的定量相關(guan) （圖 1D-E 和補充圖S3A，下麵板）。因此，通過常規流式細胞術分析PKH+巨噬細胞的總區室以評估血小板吞噬作用，因為(wei) 排除PKH + CD42a +事件會(hui) 導致吞噬效率的低估。
圖1. A) 監測調理化血小板吞噬作用的實驗裝置的示意圖概述：用GM-CSF將CD14 +單核細胞培養(yang) 9天，以分化為(wei) 單核細胞來源的巨噬細胞（MQ M1）。此後，巨噬細胞在有和沒有FcγR阻斷劑的情況下預先孵育。來自HLA-A2+供體(ti) 的新鮮分離的血小板用PKH26標記，並在補體(ti) 充足或熱滅活（HI）血清存在下與(yu) 未修飾和糖工程化的抗HLA單克隆抗體(ti) 預孵育，用於(yu) 抗體(ti) 和補體(ti) 調理。將巨噬細胞和血小板洗滌並在37°C下共孵育30分鍾，並通過流式細胞術和Imagestream進行分析 B) 通過流式細胞術分析的單核細胞來源巨噬細胞表麵補體(ti) 受體(ti) 3（Cd11b / cd18）和FcγR（FcγRI，FcγRII，FcγRIII）的表達水平。 C-E） 血小板的內(nei) 化是用 C) 常規和 D-E） 成像流式細胞術。抗CD42a-BV421染色與(yu) PKH26聯合用於(yu) 鑒定附著在細胞外部的血小板。顯示了通過成像流式細胞術獲得的指示象限的代表性圖像。
與(yu) 未調理的血小板（圖 2A，B).以抗體(ti) 濃度依賴性方式觀察吞噬作用，吞噬細胞MQ的最大百分比為(wei) 1μg/mL。盡管半乳糖基化和唾液酸化水平升高的糖工程mAb顯著增強了血小板上的補體(ti) 沉積（補充圖S1E），但這些並沒有導致更高水平的後續吞噬作用（圖2C).此外，用非糖基化IgG調理，這增加了對FcγRIII的親(qin) 和力（[21]和補充圖S2），與(yu) 未修飾的抗體(ti) （圖2C).此外，將血小板與(yu) 單獨的未修飾抗HLA單克隆抗體(ti) SN230G6或SN607D8孵育可增強吞噬作用（補充圖S4A-B），並且不受抗體(ti) Fc聚糖修飾的影響（補充圖S4C-D）。與(yu) SN230G6 + SN607D8組合類似，與(yu) 未調理的血小板相比，將血小板與(yu) 泛HLA I類抗體(ti) W6/32孵育導致吞噬作用顯著增加（圖 2D，E).以抗體(ti) 濃度依賴性方式觀察吞噬作用，不受任何抗體(ti) 聚糖修飾（圖 2E，F).這些結果表明，觀察到的吞噬作用主要不是通過補體(ti) 受體(ti) 或FcγRIIIa/b介導的。
圖2. 單核細胞來源的巨噬細胞吞噬補體(ti) 和抗體(ti) 調理血小板 A） 絕對和 B) 在補體(ti) 充足血清存在下，與(yu) 不同濃度的未修飾的hIgg1抗HLA單克隆抗體(ti) （mAb）SN230G6 + SN607D8一起孵育的血小板吞噬相對水平 C) 在補體(ti) 充足血清存在下，用未修飾和糖工程的hIgg1 SN230G6 + SN607D8 mAb預孵育的血小板之間的吞噬作用差異。 D) 絕對和 E) 在補體(ti) 充足血清存在下，與(yu) 不同濃度的未修飾的泛抗 HLA I 類 hIgg1 mAb W6/32 預孵育的血小板吞噬相對水平 F) 在補體(ti) 充足血清存在下，用未修飾和糖工程hIgg1 W6 / 32 mAb預孵育的血小板之間的吞噬作用差異。 G-H） 在補體(ti) 充足或熱滅活 （HI） 血清存在下，用 1 μg/ml 未修飾或 PG LA LA Fc 突變抗 HLA mAb（SN230G6+SN607D8 或 W6/32）預孵育的血小板的相對吞噬水平 A-H） 吞噬作用水平（%）定義(yi) 為(wei) PKH26+巨噬細胞部分（Q1 + Q2）的百分比。數據表示在2-4個(ge) 獨立實驗中使用的2-5個(ge) 不同單核細胞供體(ti) 的2個(ge) 技術重複的平均值和SD，對於(yu) 每個(ge) 獨立實驗，還使用了不同的血小板供體(ti) 。數據點的顏色表示不同的單核細胞供體(ti) 。對於(yu) 標準化，如圖所示，用1μg/ ml未修飾的抗HLAmAb孵育的血小板的吞噬作用水平設置為(wei) 1。采用Dunnet多重比較檢驗的普通單因素方差分析進行統計分析。*p ≤ .05， ****p ≤ .0001 和 ns = 不顯著 .
與(yu) 此一致，用HI血清調理的血小板不會(hui) 導致巨噬細胞吞噬作用減弱（圖2G).然而，用PG LA LA Fc突變體(ti) 進行血小板調理作用顯著消除了吞噬作用（圖2G），提示吞噬作用依賴於(yu) FcγR，但與(yu) 補體(ti) 無關(guan) 。在W6/32中觀察到相同的趨勢，其吞噬作用似乎不受HI血清（圖2H).然而，必須注意的是，在補體(ti) 充足血清存在的情況下，將血小板與(yu) 未修飾的W6/32抗體(ti) 孵育僅(jin) 會(hui) 導致低C3b沉積（補充圖S1E）。
為(wei) 了初步評估哪種FcγR可能參與(yu) 抗HLA調理血小板的吞噬作用，使用了FcγR阻斷抗體(ti) 。雖然阻斷FcγRII或FcγRIII導致吞噬作用的減少可以忽略不計，但單獨阻斷FcγRI或與(yu) FcγRII和FcγRIII聯合阻斷，導致單核細胞衍生巨噬細胞對調理血小板的吞噬作用降低（補充圖S4E-F）。我們(men) 假設在阻斷FcγRI時，對於(yu) 用低岩藻糖化抗體(ti) 調理的血小板，對FcγRIII的親(qin) 和力增加可能會(hui) 變得明顯。引人注目的是，FcγRI阻斷抗體(ti) 的存在似乎不會(hui) 影響低岩藻糖基化W6/32抗體(ti) 的吞噬作用（補充圖S4G）。
Ancell抗人Fc受體(ti) 抗體(ti) ，Fab，F（ab'）2，偶聯物
抗CD16 （FcgRIII）
抗CD32 （FcgRII）
抗CD64 （FcgRI）
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