對細胞進行鋪板要進行哪些操作

　　細胞鋪板是細胞實驗中最常見又必須掌握的一門技術，看似簡單，然而卻經常遇到如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現象，結果就是隻能整板扔掉，重新鋪板，既耽擱時間又浪費了細胞及培養板等資源。所以在進行細胞鋪板的時候應該注意哪些事情。

　　細胞居中和細胞邊緣化

　　從經濟和高效的角度來說，需要根據實驗目的選擇不同規格的培養板。如在進行藥物對待測細胞半抑製率(IC50)測試時，通常使用96孔板，一方麵可以設置濃度梯度；另外還可一次性測多個藥物，減少實驗誤差。

　　收集細胞要混勻

　　消化後的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開，最好是單個的狀態，但同時又不能損傷細胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團！然後懸浮離心後的細胞團時，先不要把所有液體都加進去！一般先加2mL液體，然後用1mL移液器輕輕將細胞吹起，細胞要像雲霧一樣散開，這樣易於形成單細胞。象下圖所示的這種移液器就非常好用。

　　接種細胞須小心

　　鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個孔裏麵加1mL的培養基，晃動使之鋪勻整個孔底，然後加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液後要放工作台靜置一下。

　　輕輕敲打勿抱團

　　細胞懸液加完後，將細胞培養板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細胞有沒有抱團。如果有抱團的話，用手指從底部輕輕敲打，使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下，效果不錯。參數要設置成振幅小而頻率高。

　　十字交叉要水平

　　觀察和敲打後放入培養箱，然後畫“十字”，就是把細胞培養板貼著培養箱擱板，前後方向來回晃動10次，再左右方向晃動10次，正好是一個“十” 字形。然後就讓它靜靜地呆在培養箱擱板上，沒事不要去動它。這裏要注意的是，托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上，培養箱的擱板要水平校正，盡量地做到水平。擱板會向一個方向傾斜，對於貼壁時間長的細胞，就算當時混勻了，放進培養箱後也搖勻了，但是重力作用下細胞也會向一側聚集。 培養箱裏麵或者外麵盡量不要放可以產生振動的儀器，比如蠕動泵、離心機、渦旋器一類的儀器。這些儀器產生的振動對細胞貼壁有影響，也可能會導致細胞貼壁不均勻。